EGCG对人食管癌ECA109细胞增殖凋亡及Survivin和VEGF mRNA表达影响的研究

摘要

目的:研究不同浓度的表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallaocatechin-3-gallate，EGCG)对体外培养的食管癌ECA109细胞增殖、凋亡及Survivin、VEGF mRNA表达的影响，初步探讨EGCG对食管癌ECA109细胞的抑制作用及其机制。
　　方法:1.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度(40、80、120μg/ml)的EGCG分别作用于食管癌ECA109细胞24h，48h，72h后，用酶标仪检测各组细胞的OD值，计算各浓度EGCG在不同时间对食管癌ECA109细胞的增殖抑制率;2.不同浓度（40、80、120μg/ml）的EGCG作用于食管癌ECA109细胞48h后，采用AnnexinⅤ-FITC和PI双染，通过流式细胞仪（Flow Cytometry，FCM）检测各组细胞的凋亡率;3.不同浓度（40、80、120μg/ml）的EGCG作用于食管癌ECA109细胞48h后，采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞Survivin和VEGF mRNA的表达情况。
　　结果:1.倒置相差显微镜下观察可见，随着EGCG干预的浓度增加，食管癌ECA109细胞产生细胞体积减小，固缩变圆，细胞染色质凝集，细胞内出现空泡等一系列细胞形态改变;2.不同浓度EGCG（40μg/ml、80μg/ml、120μg/ml）作用食管癌ECA109细胞24h后，细胞的增殖抑制率相对于对照组分别为14.24±0.72，21.60±1.03，29.56±1.27，各组间差异具有统计学意义(P＜0.05);当作用细胞48h后，细胞增殖抑制率分别为39.17±1.50，43.44±1.66，48.58±1.73，各组间差异具有统计学意义(P＜0.05);而当作用时间达到72h后，细胞增殖抑制率则分别为49.26±0.85，54.52±2.29，58.48±1.55，各组间差异具有统计学意义(P＜0.05)。对同一浓度EGCG在不同作用时间干预食管癌ECA109细胞的增殖抑制率做统计学分析，结果显示EGCG对食管癌ECA109细胞的增殖抑制作用在各组间均具有统计学意义(P＜0.05);3.流式细胞仪检测不同浓度EGCG（0μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、120μg/ml）作用下，食管癌ECA109细胞早期凋亡率、总凋亡率分别为0.0667±.03055、0.5200±.09539;4.8367±0.73146、10.3200±0.95252;12.2533±1.22696、24.1267±1.44057;23.5100±1.76847、34.0967±1.82878，实验组早期、总凋亡率均明显高于对照组，且随EGCG浓度的增加，早期凋亡和总凋亡细胞的比例都逐渐增加。实验组与对照组相比，且实验组两两之间比较P＜0.05;4.RT-PCR检测，在不同浓度EGCG（0μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、120μg/ml）作用下，食管癌ECA109细胞Survivin mRNA的表达量分别为0.5419±0.01873、0.4844±0.01478、0.3330±0.00685、0.2155±0.00304，以对照组Survivin mRNA的表达水平最高，并随EGCG浓度的增高，食管癌ECA109细胞Survivin mRNA表达量逐渐降低。食管癌ECA109细胞VEGF mRNA的表达量分别为1.0747±0.03547、0.9312±0.03899、0.5215±0.02270、0.3846±0.01732，以对照组VEGF mRNA的表达量最高，并随EGCG浓度的增高，食管癌ECA109细胞VEGF mRNA表达量逐渐降低，经过统计学分析，各组之间差异均具有统计学意义(P＜0.05);5.Survivin与VEGF mRNA表达正相关，r=0.965，P＜0.05。
　　结论:1.EGCG可抑制食管癌ECA109细胞增殖，呈时间-浓度依赖性关系;2.EGCG对食管癌ECA109细胞的凋亡具有促进作用，并且促凋亡作用呈剂量依赖性关系;3.EGCG能下调食管癌ECA109细胞中Survivin和VEGF mRNA表达，推测EGCG可能通过抑制Survivin和VEGF的表达，诱导食管癌ECA109细胞凋亡。

目录

摘要

前言

材料与方法

1．实验细胞及药物

2．主要试剂

3．主要器材

4．主要实验试剂配制

5．实验方法

6．统计学处理

结果

1．倒置相关显微镜观察EGCG干预后食管癌ECA109细胞形态变化

2．EGCG对食管癌ECA109细胞增殖的抑制作用

3．EGCG对人食管癌ECA109细胞凋亡的影响

4．EGCG对食管癌ECA109细胞Survivin mRNA表达的影响

5．EGCG对食管癌ECA109细胞VEGF mRNA表达的影响

6． Survivin与VEGF mRNA表达相关性

讨论

1．EGCG对食管癌ECA109细胞增殖的抑制

2．EGCG对食管癌ECA109细胞凋亡的影响

3．EGCG对Survivin、VEGFmRNA在ECA109细胞中表达的影响

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

VEGF、COX-2在食管癌中的研究进展 综述

致谢

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