间歇性低温刺激对ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块结构的影响

摘要

背景:
　　动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)在大于40岁的男性中发病率约为66％，在大于40岁的女性中发病率约为50％。在临床上，其主要分为冠状动脉粥样硬化、脑血管粥样硬化、外周血管粥样硬化等。冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease，CAD)是严重影响人类生命健康的疾病。据统计，大约60％的死亡由心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)造成。在我国，心血管病人的患病率处于持续上升阶段，据统计目前已达2.3亿人次，也就是说平均每5个成年人中就有1人患有心血管疾病。全国每年死于心血管疾病的患者多达350万。冠状动脉粥样硬化斑块分为稳定斑块和易损斑块。据以往研究证实，急性冠脉综合征(acute coronarysyndrome，ACS)的发生主要是因为冠状动脉易损斑块的破裂所致，而易损斑块的主要病理特征就是斑块表面的一层薄的纤维帽。基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase，MMP)可以降解细胞外基质，在AS斑块细胞外基质的重构发挥重要作用，可诱导斑块破裂，诱发ACS。而基质金属蛋白酶抑制剂(Tissue inhibitor of matrix metalloproteinase，TIMP)是MMPs的内源性特异性抑制因子，对于MMPs的活性抑制发挥重要作用。
　　据流行病学调查发现，冠心病的死亡事件与周围环境的温度密切相关，随着周围环境温度的下降，急性冠脉综合征的发病率亦随之上升。在临床工作中同样会发现，在严寒的冬天，各类心血管病的发病率及死亡率都会上升。但是低温导致急性冠脉综合征发病率上升的具体机制尚不明确。于是我们提出这样一个假设:长期的低温刺激导致斑块的失稳与动脉粥样硬化斑块的纤维帽变薄有联系。
　　目的:
　　严寒的冬天与ACS的发生密切相关，但是其确切机制尚不清楚，为了在严寒的冬天做好急性冠脉综合征的防治工作，本实验旨在探讨低温导致急性冠脉综合征发病率上升的机制。
　　方法:
　　将20只8周龄雄性ApoE基因缺陷小鼠（apolipoprotein E-deficient，ApoE-/-）被随机分为对照组(n=10)及实验组(n=10)，实验组ApoE基因缺陷小鼠每天有4小时处于4±1℃环境中（每天8:00到11:00），其余时间处于24±2℃环境中，对照组ApoE基因缺陷小鼠全天处于24±2℃环境中。经过8周的低温干预后，测定两组ApoE基因缺陷小鼠的以下指标:
　　1)、采用电子称了解两组ApoE基因缺陷小鼠的体重情况;
　　2)、采用酶法及直接选择法测定两组APOE基因缺陷小鼠的空腹血脂，包括甘油三酯(Total cholesterol，TG)、总胆固醇(Triglycerides，TG)，低密度脂蛋白胆固醇(Low-density lipoprotein Cholesterol，LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(High-density lipoprotein Cholesterol，HDL-C);
　　3)、使用罗氏血糖仪测定两组ApoE基因缺陷小鼠空腹血糖(fastingblood glucose，FBG);
　　4)、取ApoE基因缺陷的小鼠主动脉行Western Blot，了解小鼠主动脉中MMP2/3/9/14，TIMP1/2的表达量;
　　5)、ApoE基因缺陷小鼠主动脉根部切片行HE染色比较两组小鼠动脉粥样硬化斑块的大小;
　　6)、APOE基因缺陷小鼠主动脉根部切片行Masson染色比较两组小鼠动脉粥样硬化斑块内胶原含量;
　　7)、两组ApoE基因缺陷小鼠主动脉根部行MOMA2、CD3、α-SMA免疫组化染色，比较两组小鼠主动脉根部动脉粥样硬化斑块内巨噬细胞(macrophagocyte)、淋巴细胞(leukomonocyte)和血管平滑肌细胞(vascularsmooth muscle cells，VSMC)的含量。
　　结果:
　　8周的低温干预后，两组ApoE基因缺陷小鼠间体重、血脂、血糖无明显差异(P＞0.05)。实验组ApoE基因缺陷小鼠主动脉根部动脉粥样硬化斑块面积要大于对照组(P＜0.01)。实验组ApoE基因缺陷小鼠主动脉根部动脉粥样斑块内胶原及血管平滑肌细胞含量低于对照组，淋巴细胞及巨噬细胞含量高于对照组(P＜0.05或P＜0.01)。实验组ApoE基因缺陷小鼠主动脉内MMP2、MM9、MMP14表达量高于对照组(P＜0.05或P＜0.01)，TIMP1的表达量低于对照组(P＜0.05)。
　　结论:
　　1.间歇性低温刺激不会影响ApoE基因缺陷小鼠体内的糖脂代谢;
　　2.间歇性低温刺激会导致ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块的进展;
　　3.间歇性低温刺激会影响ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块的结构组成，主要是降低动脉粥样硬化斑块内血管平滑肌细胞及胶原的表达，增加巨噬细胞及淋巴细胞的表达，从而导致动脉粥样硬化斑块的不稳定;
　　4.间歇性低温刺激导致ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块的不稳定是通过提高MMP的表达，降低TIMP的表达，从而造成MMPs与TIMPs的失稳，削弱动脉粥样硬化斑块纤维帽实现的。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

5、数据统计

结果

1 间歇性低温刺激对ApoE基因缺陷小鼠体重、血糖、血脂的影响

2 间歇性低温刺激对ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块大小的影响

3 间歇性低温刺激对ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块结构的影响

4 间歇性低温刺激对ApoE基因缺陷小鼠MMPs／TIMPs表达的影响

讨论

1、ApoE基因敲除小鼠与动脉粥样硬化

2、慢性冷应激、糖脂代谢与动脉粥样硬化

3、慢性冷应激、高血压与动脉粥样硬化

4、MMPs／TIMPs与动脉粥样硬化

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

寒冷与原发性高血压发病机制的关系 综述

攻读硕士学位期间发表论文及参与科研项目

声明