miRNA-133a在泡球蚴感染所致肝星状细胞活化中作用及与肝纤维化的关系

摘要

目的：探讨miR-133a在泡球蚴蛋白共培养所致肝星状细胞活化及泡球蚴感染所致小鼠肝纤维化中的作用。 方法：建立肉眼直视下肝脏门静脉接种泡球蚴感染小鼠肝脏模型，对照组注射生理盐水。造模后1月，3月取肝组织，H&E染色检测泡球蚴感染情况，天狼猩红染色检测胶原合成情况，免疫组化检测α-SMA在肝组织中的表达情况。qRT-PCR检测COL1A1、α-SMA和miRNA-133a的表达情况。泡球蚴蛋白（60μg/ml，600μg/ml）体外与肝星状细胞共培养24h后，qRT-PCR检测肝星状细胞中 COL1A1、α-SMA、Smad2、Smad3、Smad4、TGFβ-RI、TGFβ-RII和miRNA-133a基因表达水平。Weston-blot检测肝星状细胞中COL1A1和α-SMA蛋白表达水平。LX-2细胞转染miRNA-133a mimics后检测LX-2细胞中COL1A1、α-SMA、Smad2、Smad3、Smad4和miR-133a基因表达水平。Weston-blot检测COL1A1和α-SMA蛋白表达水平。
　　结果：（1）成功建立肉眼直视下肝脏门静脉接种泡球蚴感染小鼠模型，泡球蚴感染1月和3月后，小鼠病灶旁肝脏中α-SMA和I型胶原mRNA及蛋白表达水平较假手术组显著升高，具统计学差异（P<0.01）。泡球蚴感染1月小鼠病灶近旁肝脏中 miRNA-133a表达水平较假手术组显著升高，具统计学差异（P<0.01）。（2）泡球蚴蛋白可刺激肝星状细胞α-SMA和COL1A1 mRNA水平及蛋白水平的显著升高（P<0.0001），同时miRNA-133a表达显著升高（P<0.0001）。泡球蚴蛋白刺激miRNA-133a模拟物转染LX-2细胞，α-SMA、COL1A1、Smad2、Smad3和Smad4 mRNA及蛋白表达水平均较未转染miRNA-133a模拟物LX-2细胞显著升高（P<0.05），提示miRNA-133a可促进泡球蚴诱发的肝星状细胞活化并影响TGF-β/Smad信号通路中的关键蛋白。
　　结论：miRNA-133a的高表达可促进泡球蚴诱导的肝星状细胞的活化并影响TGF-β/Smad信号通路中关键蛋白的表达。

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前言

研究内容与方法

1 实验动物

2 材料与试剂

3 研究方法

结 果

1泡球蚴感染小鼠模型肝脏病理学检测

2 小鼠原代肝星状细胞生物学特性

3泡球蚴蛋白对肝星状细胞活化后相关蛋白、基因表达的影响

4 miRNA-133a minics对泡球蚴蛋白刺激的肝星状细胞活化的影响

5生物信息学技术预测miR-133a的相关靶基因

讨论

小结

参考文献

致谢

综述:肝星状细胞的研究进展及在肝纤维化中的作用

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