CXJZ95-198菌株分泌果胶酶和半纤维素酶的活性研究及果胶酶的分离纯化

摘要

该论文对CXJZ95-198蓖株在葡萄糖、甘露糖、木聚糖、魔芋粉及果胶五种不同碳源培养基中胞外酶蛋白质总量、还原糖及果胶酶活性的影响进行了研究;对果胶酶、木聚糖酶及β-甘露聚糖酶在甘露糖培养基中的酶活进行了比较;对CXJZ95-198菌株在不同碳源培养基中的发酵液在SDS-PAGE电泳中分泌出的蛋白带作了比较;对CXJZ95-198菌株所产生的胞外酶系中果胶酶进行了分离纯化.在该研究条件下,得到如下结论:(1)CXJZ95-198菌株在以葡萄糖作为碳源的培养基中蛋白质含量变化最大,达到了1.28mg/ml,0.94mg/ml,0.75mg/ml,0.73mg/ml;在这五种培养基中,以甘露糖培养基中果胶酶活性最高,达到了79.39U/ml,其次依次为葡萄糖培养基,魔芋粉培养基,木聚糖培养基,最后为果胶培养基,分别为73.33U/ml,24.25U/ml,17.45U/ml,15.98U/ml.(2)在甘露糖培养基中,β-甘露聚糖酶活性最高,达到了85.55U/ml;果胶酶活性次之,为73.39U/ml;木聚糖酶活性相对较低,有17.91U/ml.(3)在葡萄糖、甘露糖、木聚糖、魔芋粉及果胶五种不同碳源培养基中的发酵液在SDS-PAGE电泳中分别分泌出32条,33条,35条,36条和21条蛋白带(含亚基);多数可比较的蛋白质电泳谱带的颜色深浅呈魔芋粉>甘露糖>木聚糖>葡萄糖>果胶的趋势.(4)确立了以葡萄糖培养基6h的发酵液为提取果胶酶的最初取样点,发酵液经离心,丙酮沉淀,Sephadex G-75葡聚糖凝胶柱层析后获得了凝胶电泳均一的样品,比活力较原酶液提高了9.8倍,回收率达到了32.98％,用SDS-PAGE凝胶电泳测的纯化后的果胶酶分子量为42.2KD.