动物源性食品中棉酚及其代谢产物gossypolone检测技术研究

摘要

本文以棉酚为研究对象，初步研究了棉酚在土鸡及鲫鱼体内的代谢产物;制备了棉酚代谢产物gossypolone;建立了鸡肝中游离棉酚、氧化产物gossypolone、(+)-棉酚及(-)-棉酚LC-MS/MS定量分析方法;开展了对动物源性食品中游离棉酚及棉酚氧化产物gossypolone、(+)-棉酚及（-）-棉酚含量测定的市场抽样调查。主要研究结果如下:
　　(1)采用ESI-QTOF/MS对土鸡、鲫鱼的血浆、肝脏样品进行分析，寻找到主要代谢产物，即棉酚的氧化产物gossypolone，分子式为C30O26H11，结构式为6，6'，7，7'-四羟基-5，5'-二异丙基-3，3'-二甲基-[2,2']-联萘-1，1'，4，4'-四酮基-[8，8]-二甲醛，分子量为546.1526。
　　(2)用化学合成的方法，制备得到棉酚氧化产物gossypolone。同时，采用LC-MS/MS和ESI-QTOF/MS飞行时间质谱对产物的结构进行验证，使用HPLC对产物的纯度进行分析。分析结果显示，试验中所制备的产物分子量、分子式、结构式均与棉酚氧化产物gossypolone一致，可以推测此产物为棉酚氧化产物gossypolone;产物纯度≧95％。
　　(3)采用LC-MS/MS方法测定鸡肝中棉酚及其氧化产物gossypolone的含量。通过方法学验证及再验证，样品定量分析过程中不会受到生物样品中内源性基质的干扰，线性良好，被分析生物样品各方法学验证指标基本满足指导原则中的定量分析要求，可以用于鸡肝、鸡肉、鱼肝、鱼肉等生物样品中游离棉酚及其氧化产物gossypolone的定量分析。
　　(4)建立鸡肝中(+)-棉酚和（-）-棉酚LC-MS/MS定量分析方法，样品定量分析过程中不会受到生物样品中内源性基质的干扰，线性良好，被分析生物样品各方法学验证指标均符合指导原则中的定量分析要求，可以用于鸡肝、鸡肉、鱼肝、鱼肉等生物样品中(+)-棉酚、(-)-棉酚的定量分析。
　　(5)从乌鲁木齐市三个农贸市场及阜康市、昌吉市各两个农贸市场上购买动物源性食品90份，其中鸡肝、猪肝，鱼肝、鸡肉、猪肉，鱼肉样品各15份。采用LC-MS/MS对动物源性食品中游离棉酚、棉酚氧化产物gossypolone、(+)-棉酚、（-）-棉酚等成分进行含量测定。检测结果:肝脏样品中，游离棉酚含量为0.2231～1.5463μg/g，检出率为82.2％;(+)-棉酚含量为0.2143～0.7420μg/g，检出率为71.1％;(-)-棉酚含量为0.2045～0.7372μg/g，检出率为64.4％;棉酚氧化产物gossypolone未检出。肌肉样品中均未检出游离棉酚、棉酚氧化产物gossypolone、(+)-棉酚、（-）-棉酚。

目录

声明

论文说明

摘要

缩略词表

第1章 绪论

1．1 棉酚的概括及化学性质

1．2 游离棉酚的毒性及危害

1．2．1 游离棉酚对畜禽的毒性及危害

1．2．2 游离棉酚对水产动物的毒性及危害

1．2．3 游离棉酚对人体的毒性及危害

1．3 棉酚的生物活性及应用

1．3．1 棉酚的抗生育活性

1．3．2 棉酚的抗肿瘤活性

1．3．3 棉酚的抗病毒和抗寄生虫活性

1．3．4 棉酚的抗氧化活性

1．3．5 棉酚的抗炎活性

1．4 棉酚的体内代谢

1．5 游离棉酚拆分方法

1．6 棉酚检测方法概述

1．7 本项目研究的目的及意义

1．8 研究的主要内容

1．9 创新点

1．10 技术路线

第2章 棉酚在土鸡、鲫鱼体内代谢产物的初步研究

2．1 材料与方法

2．1．1 药品与试剂

2．1．2 试验材料

2．1．3 仪器与设备

2．1．4 试验方法

2．2 结果与分析

2．2．1 棉酚代谢产物预测数据库的建立

2．2．2 代谢产物的寻找方法

2．2．3 代谢产物的图谱分析

2．3 讨论

2．4 本章小结

第3章 棉酚代谢产物gossypolone的半合成法制备

3．1 材料与方法

3．1．1 药品与试剂

3．1．2 仪器与设备

3．1．3 棉酚代谢产物gossypolone的制备工艺

3．1．4 棉酚氧化产物gossypolone的验证

3．2 结果与分析

3．2．1 制备工艺的优化

3．2．2 棉酚氧化产物的验证

3．3 讨论

3．4 本章小结

第4章 鸡肝中游离棉酚及氧化产物gossypolone LC-MS／MS定量分析法的建立

4．1 材料与方法

4．1．1 药品与试剂

4．1．2 试验材料

4．1．3 仪器与设备

4．1．4 试验方法

4．2 结果与分析

4．2．1 样品前处理及色谱条件质谱条件优化

4．2．2 方法学验证

4．3 讨论

4．3．1 方法再验证

4．3．2 棉酚氧化产物提取回收率偏低的原因

4．4 本章小结

第5章 鸡肝中(+)-棉酚和(-)-棉酚LC-MS／MS定量分析法的建立

5．1 材料与方法

5．1．1 药品与试剂

5．1．2 试验材料

5．1．3 仪器与设备

5．1．4 试验方法

5．2 结果与分析

5．2．1 方法学验证

5．3 讨论

5．3．1 方法再验证

5．3．2 衍生化方法的选择

5．4 本章小结

第6章 动物源性食品中棉酚及棉酚氧化产物gossypolone、(+)-棉酚及(-)-棉酚含量测定

6．1 材料与方法

6．2 结果与分析

6．3 讨论

6．4 本章小结

第7章 结论与展望

7．1 结论

7．2 展望

参考文献

致谢

作者简介