PA-MSHA预处理对严重脓毒症大鼠中性粒细胞体外移行影响的研究

摘要

目的:
　　本课题通过建立大鼠脓毒症及严重脓毒症模型,研究铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝素(PA-MSHA)预处理对脓毒症及严重脓毒症大鼠模型中性粒细胞体外移行能力及生存时间的影响;对细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10、iNOS)的影响;对各脏器组织形态学及血清生化指标(ALT、AST、Creat、BUN、CK、CK-MB、LAC)的影响,探讨严重脓毒症中中性粒细胞移行障碍的机制及PA-MSHA预防感染的可能机制。
　　方法:
　　1.SPF级健康雄性SD大鼠72只,随机分为假手术组(C组)、脓毒症组(S组)、严重脓毒症组(SS组),S组取1.6ml/kg粪便悬液,SS组取4ml/kg粪便悬液,生理盐水稀释至3毫升,采用改良人粪便悬液腹腔注射法建立脓毒症及严重脓毒症模型。C组动物注射相同剂量的生理盐水。比较大鼠一般情况、临床严重程度、48小时生存情况、平均动脉压(MAP)、动脉血气指标、动脉乳酸值(LAC);生化指标、细胞因子;心脏取血行血培养;光镜下观察心、肝、肺、肾、肠组织形态学改变。
　　2.SPF级健康雄性SD大鼠216只,随机分为假手术组(C组)、脓毒症7小时组(S7组)、脓毒症15小时组(S15组)、严重脓毒症7小时组(SS7组)、PA-MSHA预处理组(PA组)、PA-MSHA预处理脓毒症7小时组(PA-S7组)、PA-MSHA预处理脓毒症15小时组(PA-S15组)、PA-MSHA预处理严重脓毒症7小时组(PA-SS7组)。PA组、PA-S7组、PA-S15组和PA-SS7组造模前连续7天,每天经腹部皮下注射0.3mlPA-MSHA。观察大鼠一般情况、72小时生存率;Percoll非连续密度离心法分离外周血中性粒细胞,比较各组体外中性粒细胞趋化细胞数;ELISA法测定并比较各组血清TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10、iNOS浓度,检测生化指标(ALT、AST、Creat、BUN、CK、CK-MB)。动物处死后取取心、肝、肺、肾组织HE染色,光镜下比较各组器官病理组织学变化。
　　结果:
　　1.(1)一般情况:主要从进食、呼吸、自发性活动及对外源性刺激的警觉性评价,SS组大鼠较S组大鼠差;(2)临床严重程度:C组、S组、SS组大鼠临床严重程度评分分别集中于1分、2-3分、3-4分,分别处于正常、轻中度、中重度;(3)48小时生存情况:C组生存率100％;S组和SS组生存率比较:6h(88%vs75%),12h(57%vs5%),18h(25%vs0%);与S组比较,SS组生存时间明显下降;(4)平均动脉压:S组和SS组较C组明显降低;(5)动脉血气和乳酸:与C组比较,S组和SS组动脉血PCO2、HCO3-、BE降低,SS组PH、PO2、SaO2%降低,SS组LAC升高;与S组比较,SS组动脉血PO2、SaO2%降低;(6)生化指标:与C组比较,S组和SS组BUN升高,SS组ALT、AST、Creat、CK升高;与S组比较,SS组ALT、BUN升高;(7)细胞因子:与C组比较,S组IL-6及IL-10浓度升高,SS组IL-6和IL-10浓度显著升高;且SS组IL-6和IL-10浓度高于S组(P<0.05);(8)血培养:C组血培养无细菌生长;S组和SS组血培养结果均为(8/8)阳性:大肠埃希菌;(9)各组病理学改变如下:S组及SS组大鼠心、肺、肝、肾、肠均见病理改变,SS组较S组病变严重。
　　2.(1)一般情况:主要从进食、呼吸、自发性活动及对外源性刺激的警觉性评价,S7组及S15组大鼠一般情况较PA-S7组及PA-S15组对应时间差;SS7组大鼠一般情况较S7组差,PA-SS7组大鼠一般情况较SS7组对应时间轻微;(2)72小时生存情况:①生存时间(中位数):PA-S组明显长于S组(28.65hvs17.75h);SS7组生存时间短于S组(9.15hvs17.75h);PA-SS7组生存时间较SS7组延长(14.1hvs9.15h);②生存率:C组和PA组在处理后72小时生存率100%;生存曲线比较(log-rank检验):C组>S组:x2=16.94,P<0.01;C组>SS组:x2=16.94,P<0.01;S组>SS组:x2=6.12,P<0.05;(3)中性粒细胞体外趋化数:与C组相比,S7组、S15组、SS7组、PA-S7组、PA-S15组、PA-SS7组趋化中性粒细胞数显著下降(P<0.01);S15组、PA-S15组、SS7组、PA-SS7组中性粒细胞数低于S7组(P<0.01);SS7组中性粒细胞数多于S15组(P<0.05);与PA组相比,PA-S7组、PA-S15、PA-SS7组中性粒细胞数显著下降(P<0.01),PA-S15组、PA-SS7组中性粒细胞数低于PA-S7组(P<0.01);PA-SS7组中性粒细胞趋化数多于PA-S15组(P<0.05);PA-S7组中性粒细胞数较S7组明显增加(P<0.01)。
　　3.(1)血清细胞因子浓度①TNF-α浓度:与C组比较,除PA组无差异外,其余各组TNF-α浓度均明显升高(P<0.01);与PA组比较,S7组、PA-S7组TNF-α浓度均升高(P<0.05),SS7组、PA-SS7组TNF-α浓度均明显升高(P<0.01);SS7组TNF-α浓度高于S7组(P<0.05);②IL-6浓度:与C组比较,除PA组无差异外,S7组、PA-S7组IL-6浓度均升高(P<0.05),SS7组、PA-SS7组IL-6浓度均明显升高(P<0.01);与PA组比较,S7组、PA-S7组IL-6浓度均升高(P<0.05),SS7组、PA-SS7组IL-6浓度均明显升高(P<0.01);SS7组IL-6浓度高于PA-S7组、PA-SS7组(P<0.05),明显高于S7组(P<0.01);③IL-8浓度:与C组比较,除PA组无差异外,S7组IL-8浓度升高(P<0.05),PA-S7组、SS7组、PA-SS7组IL-8浓度明显升高(P<0.01);SS7组IL-8浓度高于S7组(P<0.05);④IL-10浓度:与C组比较,PA组、S7组、PA-S7组IL-10浓度均升高(P<0.05),SS7组、PA-SS7组IL-10浓度均明显升高(P<0.01);与PA组比较,PA-SS7组IL-10浓度升高(P<0.05),SS7组IL-10浓度明显升高(P<0.01);与S7组比较,PA-SS7组IL-10浓度升高(P<0.05),SS7组IL-10浓度明显升高(P<0.01)。PA-SS7组IL-10浓度明显低于SS7组(P<0.01);⑤iNOS浓度:S7组和SS7组iNOS浓度高于C组、PA组、PA-S7组(P<0.05);PA-SS7组iNOS浓度低于SS7组(P<0.05);(2)生化指标①ALT:与C组比较,S7组和PA-SS7组ALT浓度升高(P<0.05),SS7组ALT浓度明显升高(P<0.01);与PA组相比,S7组、PA-SS7组ALT升高(P<0.05),SS7组ALT浓度明显升高(P<0.01);SS7组ALT浓度高于S7组、PA-SS7组(P<0.05),明显高于PA-S7组(P<0.01);②AST:SS7组AST浓度高于C组、PA组、S7组、PA-S7组及PA-SS7组(P<0.05);PA-SS7组AST浓度高于C组(P<0.05);③Creat和UBN:SS7组Creat和UBN浓度均高于其余各组(P<0.05);④CK:SS7组高于S7组和PA-SS7组(P<0.05),显著高于C组、PA-S7组(P<0.01);⑤CK-MB:SS7组明显高于C组和PA组(P<0.01),高于S7组、PA-S7组及PA-SS7组(P<0.05);(3)各组脏器病理改变:各组脏器病理改变由轻到重顺序依次为:PA-S7组、S7组、PA-SS7组、SS7组。
　　结论:
　　1.脓毒症早期可出现中性粒细胞体外移行能力抑制,严重脓毒症时则发生中性粒细胞体外移行障碍。
　　2.PA-MSHA预处理可通过下调iNOS水平改善脓毒症中性粒细胞体外移行能力,从而减轻脓毒症损伤,减缓脓毒症病情进展,延长生存时间。
　　3.连续7天0.3mlPA-MSHA预处理无法改善严重脓毒症中性粒细胞体外移行能力,但可通过下调炎症因子水平,一定程度上减轻损害,延长生存时间。

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前言

第一部分 腹腔注射人粪便悬液建立大鼠脓毒症及严重脓毒症模型

材料与方法

1 材料

2 方法

结果(Result)

3 结果

1．大鼠脓毒症及严重脓毒症模型的制作

第二部分PA-MSHA严重脓毒症大鼠中性粒细胞体外移行影响的研究

材料与方法

1 材料

2方法

结果

讨论

参考文献

致谢