钙敏感受体及紧密连接蛋白-14在草酸钙结石大鼠肾组织中的表达及意义

摘要

目的：
　　本研究通过构建大鼠肾草酸钙结石模型，观察CaSR及Claudin-14在两组大鼠肾组织中的表达变化，同时，观察CaSR及Claudin-14与大鼠血清BUN、Cr、Ca2+含量、24h尿量、24h尿钙以及尿pH相关性。
　　方法：
　　选用成年S-D雄性大鼠30只，随机分为2组（n=15），对照组和结石组，采用1％乙二醇自来水自由饮水+2%氯化铵2ml灌胃构建大鼠肾草酸钙结石模型；实验第28天收集实验大鼠24h尿液，进行24h尿钙含量测定。水合氯醛麻醉下腔静脉穿刺取血4ml，3000r/min4℃离心10min，取上清，检测血清 BUN、Cr、Ca2+含量；取血后处死实验大鼠，手术切取左肾，石蜡包埋后切片行常规 HE染色，同时行免疫组织化学染色观察CaSR阳性表达情况；RT-PCR法检测肾脏组织中的Claudin-14mRNA的表达；Western-Blotting法检测肾脏组织CaSR和Claudin-14蛋白的表达。
　　结果：
　　1.与对照组比较，结石组血肌酐、尿素氮显增高（P＜0.01），结石组24 h尿钙排泄量、24h尿量显著增高（P＜0.01），两组血钙水平差异无统计学意义（P＞0.05），两组间24 h尿pH差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　2.肉眼可见结石组大鼠肾组织肿胀，表面点状分布黄白色结晶或钙化。HE染色，普通光学显微镜下观察发现结石组大鼠肾组织多数肾小管管腔内弥漫散布无色透明、片状结晶。
　　3.光镜下观察见CaSR在两组大鼠肾小管上皮细胞均有不同程度的阳性表达，且结石组大鼠肾小管上皮细胞CaSR呈弥漫性表达且强度明显增高。
　　4.与对照组比较，结石组Claudin-14mRNA显著增高，组间差异有统计学意义（P＜0.01）。
　　5.与对照组比较，结石组CaSR蛋白含量显著增高，差异有统计学意义（P＜0.05）；Claudin-14蛋白含量显著增高，对照组未见表达，差异有统计学意义（P＜0.01）。同时，CaSR和 Claudin-14蛋白表达也存在正相关(r﹦0.896，P＜0.01)。
　　6. CaSR和Claudin-14蛋白表达与24h尿钙均呈正相关，分别为r=0.878，P＜0.01；r=0.934，P＜0.01。
　　结论：
　　1.采用1％乙二醇自由饮水﹢2％氯化铵每日2mL灌胃可以建立稳定的肾草酸钙结石大鼠模型。
　　2.CaSR及Claudin-14在结石组大鼠肾组织中高表达，且与大鼠24h尿钙排泄呈显著正相关，提示CaSR在结石大鼠肾组织表达增高可能通过上调Claudin-14表达，抑制肾小管对钙离子的重吸收，进而促进尿钙排泄增加，从而参与肾小管结石结晶的形成。

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缩略语表

前言

肾草酸钙结石大鼠肾组织中钙敏感受体及紧密连接蛋白-14的表达及作用

1材料

1.1动物来源

1.2主要试剂

1.3主要实验仪器

2方法

2.1肾草酸钙结石大鼠模型的构建

2.2大鼠血、尿及肾组织标本的采集与保存

2.3肾组织苏木精-伊红染色

2.4肾组织免疫组织化学染色

2.5 RT-PCR 检测Claudin-14 mRNA表达

2.6 Western—blotting检测CaSR、Claudin-14蛋白的表达

2.7统计学处理

3实验结果

3.1实验大鼠一般情况

3.2 大鼠血、尿生化指标

3.3大鼠肾组织形态学观察结果

3.4大鼠肾组织CaSR蛋白免疫组织化学染色结果

3.5 大鼠肾组织Claudin-14 mRNA的表达

3.6大鼠肾组织CaSR、Claudin-14蛋白的水平

3.7 CaSR和Claudin-14蛋白表达与24h尿钙、尿量排泄相关性分析

4讨论

结论

参考文献

文献综述

致谢

作 者 简 介

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