莱姆病、布鲁菌病诊断方法的建立和流行病学调查

摘要

目的：
　　1.在新疆北疆部分地区采集优势蜱种，进行莱姆病螺旋体和布鲁菌分子流行病学调查，初步揭示蜱在莱姆病螺旋体和布鲁菌病原传播中可能起到一定作用；
　　2.选取新疆塔城161、165、167三个团场，对牧场职业人群（牧民、半农半牧、兽医）进行莱姆病和布鲁菌病病原学和血清学调查，研究职业人群这两种疾病的感染情况；
　　3.利用纯化的莱姆病螺旋体BmpA蛋白和布鲁菌VirB5蛋白，制备和筛选相应的单克隆抗体，为后期制备纳米颗粒试剂条奠定基础；
　　方法：
　　1.在新疆北疆部分地区采集寄生蜱和游离蜱，通过采用PCR检测技术来检测蜱中布鲁菌和莱姆病螺旋体的携带情况；
　　2.在新疆塔城161、165、167三个团场中采集牧场职业人群的血样共246份，通过采用病原学和血清学两种方法对布鲁菌和莱姆病螺旋体进行检测，以此得到血样中这两种病原的阳性率；
　　3.对“BmpA”和“VirB5”，分别采用免疫小鼠、细胞融合、挑取克隆、单克隆细胞两次筛选和单克隆细胞亚类鉴定等方法获取单抗细胞株，采用Western Blot进行单抗筛选，以此获得最优抗体。
　　结果：
　　1.在对新疆北疆各地硬蜱检测中，检测到布鲁菌阳性率在寄生蜱中为7.73％（32/414），游离蜱中未检测到阳性样本，亚洲璃眼蜱中为5.30%（7/132），刻点血蜱中为8.74%（16/183），边缘革蜱中为5.26%（2/38），图兰扇头蜱中为17.50%（7/40）；检测到伯氏疏螺旋体阳性率在寄生蜱中为3.86%（16/414），在游离蜱中为35.07%（47/134），亚洲璃眼蜱中为5.30%（7/132），刻点血蜱中为3.82%（7/183），边缘革蜱中为5.26%（2/38）。
　　2.在对塔城牧场职业人群血样检测中，通过病原学方法和血清学方法检测布鲁菌的阳性率分别为2.03%（5/246）和19.51%（48/246）；通过血清学方法检测莱姆病螺旋体的阳性率为11.38%（28/246），病原学方法未检测到莱姆病疏螺旋体。
　　3.免疫效价检测结果，“BmpA”选择3号组小鼠进行细胞融合实验，“VirB5”选择2号组小鼠进行细胞融合实验。单克隆细胞第一次筛选，“BmpA”和“VirB5”均得到41株阳性杂交瘤细胞株；单克隆细胞第二次筛选，“BmpA”得到12株阳性杂交瘤细胞株，“VirB5”得到6株阳性杂交瘤细胞株；单克隆细胞亚类鉴定，“BmpA”得到12株IgG类型的阳性杂交瘤细胞株，“VirB5”得到6株IgG类型的阳性杂交瘤细胞株；Western Blot进一步筛选阳性杂交瘤细胞株，“BmpA”的5号细胞株和“VirB5”的19号细胞株获取的抗体与对应蛋白结合更好。
　　结论：
　　1.蜱在家畜水平传播布鲁菌中起到一定作用；亚洲璃眼蜱、刻点血蜱、边缘革蜱有可能是莱姆病螺旋体的媒介生物，该结论扩大了莱姆病螺旋体媒介生物的范围。
　　2.牧场职业人群的血样检测结果显示，莱姆病螺旋体和布鲁菌在牧场职业人群中存在高感染性，尤其是布鲁菌，应加强布病疫区职业人群献血人群的筛查工作。
　　3.本研究制备的“BmpA”和“VirB5”单克隆抗体，对相应蛋白具有良好的特异性与敏感性，为后期组织中检测病原诊断方法的建立奠定了基础。

目录

声明

中英符号表

引言

第一章北疆各地硬蜱布鲁菌和莱姆病螺旋体的检测

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

第二章新疆塔城布鲁菌病和莱姆病的流行病调查

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

第三章莱姆病螺旋体BmpA和布鲁菌VirB5蛋白单克隆抗体的制备

1材料和方法

2结果

3讨论

参考文献

结论

创新点

文献综述综述一:布鲁菌病诊断方法和流行病学的研究进展

综述二:莱姆病诊断方法和流行病学的研究进展

附录

致谢

作者简介

导师评阅表