新疆PRRSV感染调查及中药多糖、共轭亚油酸钙对仔猪免疫调节的研究

摘要

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起猪的一种急性、高度接触性传染病，猪群感染PRRSV后不仅导致母猪繁殖障碍与仔猪肺炎，而且因免疫抑制而发生病原体多重感染，是我国重点控制的动物疫病之一。免疫接种是控制本病的主要措施，而疫苗免疫的效果与猪群的感染状况、流行株的基因组成密切相关。近年来，一种采用营养元素与中药免疫调节剂来辅助提高猪群疫苗免疫效果及抗感染能力的方法得到了动物营养与兽医界的共同关注。通过在饲料中添加具有免疫活性的天然营养素及中药免疫调节剂来逐步替代抗生素及化学药物，已成为健康养猪的发展趋势。本研究以评价营养元素与中药多糖对仔猪的免疫调节作用为目的，在开展本地区不同养殖模式猪场PRRSV感染调查、流行毒株分离鉴定与基因组序列分析基础上，选择黄芪多糖、板蓝根多糖及共轭亚油酸钙在断奶仔猪中应用。通过测定其 PRRS灭活疫苗抗体效价、T淋巴细胞增殖和细胞因子水平来分析评价几种免疫调节剂的作用及方式，并对共轭亚油酸钙对仔猪的生长性能及脂肪代谢影响进行了测定。主要内容与结果如下: 1、在PRRSV、猪瘟病毒（CSFV）和猪流感病毒（SIV）单独RT-PCR检测方法的基础上，建立了检测PRRSV、CSFV和SIV的复合RT-PCR检测方法。用该方法对2012年-2013年间采集自新疆部分地区规模化养猪场、散养户和屠宰场76个场点的样品1629份进行了PRRSV的病原学检测。结果：规模化猪场、散养户猪场和屠宰点猪只PRRSV阳性检出率分别为5.32%、7.76%和2.81%；PRRSV+CSFV二重感染阳性检出率分别为0.59%、1.22%和0.65%；SIV+CSFV二重感染和PRRSV+CSFV+SIV三重感染均为0。 2、从发病的PRRS疫苗免疫仔猪体内分离得到一株PRRSV新疆分离株，并对其进行细胞病变观测、电镜观察和毒力检测（TCID50）。结果显示，分离的PRRSV新疆株能使Marc-145细胞产生明显的细胞病变；电镜观察到具有典型PRRSV外形特征的病毒粒子；在Marc-145细胞上的TCID50为10-5/ml；将所分离的PRRSV毒株命名为XJu-1，并对其进行了全基因组克隆测序及序列分析。结果表明该毒株的全基因组大小为14987bp，包括一个poly(A)，属于北美型PRRSV。XJu-1最大的分子特征是在NSP2基因存在不连续缺失150个氨基酸，属基因变异株。 3、选用35头28日龄长白二元杂交断奶仔猪，随机分成7组，分别为黄芪多糖+板蓝根多糖组合高低剂量组、黄芪多糖高低剂量组、板蓝根多糖高低剂量组及对照组，试验期为64d。通过对血清中的免疫抗体水平监测，评价多糖组合对PRRSV灭活苗免疫抗体的影响。结果显示在各试验组免疫后第7天起，抗体水平均高于未用药对照组，黄芪多糖、板蓝根多糖的单剂组分别在免疫后34、44天时达到峰值，随后呈下降趋势。而黄芪多糖+板蓝根多糖组合组仔猪在免疫PRRS灭活苗后的34天时抗体水平达到峰值。各试验组免疫后的抗体水平消长呈抛物线趋势，而黄芪多糖+板蓝根多糖组合组产生的抗体水平最高，且持续时间更长。 4、通过MTS比色法检测黄芪多糖+板蓝根多糖组合对体外增强猪脾脏淋巴细胞免疫活性的作用，及对淋巴细胞分泌IL-2、IL-6和IFN-γ的影响。在猪脾脏淋巴细胞悬液中加入黄芪多糖+板蓝根多糖组合、黄芪多糖、板蓝根多糖，使每孔多糖含量分别为200ug/ml、100ug/ml、50ug/ml，同时设空白对照组和ConA组。结果显示，黄芪多糖+板蓝根多糖组合及单剂单独使用或联合ConA都可以有效的刺激淋巴细胞增殖和分泌IL-2、IL-6和IFN-γ，其效果为黄芪多糖+板蓝根多糖组合>黄芪多糖>板蓝根多糖，且均与药物浓度呈正相关关系。 5、试验选用240头25日龄体重5.77Kg左右的杜长大三元杂交断奶仔猪，随机分为4个处理组，每个处理组6个重复，每个重复组10头仔猪。在相同饲养条件下自由采食，4种不同CaCLA处理组添加量为0、0.5%、1%和1.5%，试验期为25d。结果表明：各试验组与对照组相比，PRRS灭活疫苗免疫抗体水平差异不显著(P>0.05)；试验组血清中IFN-?和IL-1的含量与对照组相比明显降低、差异显著(P<0.05)，但与CaCLA的添加量无明显的关系；1.5% CaCLA试验组血清的IL-6的含量与对照组相比差异显著(P<0.05)；试验组血清中TNF-ɑ与对照组相比有下降趋势，但差异不显著(P>0.05)；试验组与对照组相比CD4+和CD8+含量差异不显著(P>0.05)；各试验组断奶仔猪平均日增重、平均日采食量和饲料/增重与对照组相比差异不显著(P>0.05)。各试验组断奶仔猪血清中总胆固醇(CHO)含量、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)含量与对照组相比均差异不显著(P>0.05)。

目录

声明

主要缩略词

引言

第一章 文献综述

第一部分 猪繁殖与呼吸综合征综述

1、PRRSV历史

2、病毒分类

3、病毒特征

4 致病机制

5 流行病学

6 临床/病理症状

7 PRRSV诊断/检测技术

8 PRRS疫苗

第二部分 共轭亚油酸钙及中药多糖综述

1 共轭亚油酸钙

2 中药多糖

第二章 试验研究

试验一 新疆部分地区生猪PRRSV感染调查

1 材料与方法

2 结果

3 讨 论

4 小 结

试验二 PRRSV新疆株分离鉴定及全基因组序列分析

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

4 小结

试验三 APS+IRPS组合对PRRS灭活疫苗免疫抗体水平的影响

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小 结

试验四 APS+IRPS组合对体外淋巴细胞增殖和细胞因子分泌的影响

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小 结

试验五、日粮中添加不同剂量CaCLA对断奶仔猪免疫功能、生长性能及血脂含量的影响

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第三章 全文结论与总结

1 全文结论

2 创新点

参考文献

致谢

作 者 简 介

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