大黄素影响大鼠胃平滑肌细胞钙敏感性调节机制的研究

摘要

目的：研究大黄素对G蛋白偶联的钙敏感性调节影响的机制。　　方法：用酶分解法分离Wistar大鼠胃平滑肌细胞。采用平滑肌细胞内钙钳制技术使平滑肌细胞内的游离钙离子水平控制在某一特定水平。先观察大黄素是否通过G蛋白偶联发挥作用，将实验分四组：①大黄素组；②大黄素+GDP类似物GDPβs组；③GDP类似物GDPβs组；④正常对照组。各组均分五个浓度梯度，大黄素组为1，5，10，50，100μmol/L；GDPβs组为10，50，100，500，1000μmol/L；大黄素+GDPβs组为前两组浓度相应一一配伍而成。再观察大黄素是否通过RhoA途径发挥作用，将实验分为两组：加C3-transferase组和正常对照组。再用图像分析系统测量平滑肌细胞的长度。采用Westernblotting分析大黄素引起RhoA在细胞内的蛋白表达量的变化。采用激光扫描共聚焦显微镜和免疫荧光技术分析RhoA在细胞内的时空分布变化。　　结果：大黄素在平滑肌细胞内游离钙离子水平固定时剂量依赖性胃平滑肌细胞收缩，这种收缩是剂量依赖性；G蛋白降解产物GDP类似物GDPβs可舒张胃平滑肌细胞，表现为剂量依赖性；GDPβs也可对抗大黄素收缩胃平滑肌细胞作用，同样表现为剂量依赖性；C3-transferase(RhoA抑制剂)抑制大黄素引起的平滑肌细胞收缩；大黄素可引起RhoA膜移位及量的变化.　　结论：大黄素通过RhoA途径调节G蛋白偶联的钙敏感性，促进胃肠平滑肌收缩。

目录

论文说明：英文缩略词表

前言

一材料和方法

二实验结果

三讨论

参考文献

综述：胃肠动力的钙水平调节

前言

1钙离子在细胞水平的分布

2平滑肌钙通道

3平滑肌细胞内游离钙离子浓度的调节

4钙离子在胃肠平滑肌收缩机制中的作用

4钙离子在胃肠平滑肌舒张机制中的作用

参考文献

致谢