糖尿病肾病AGEs-RAGE系统的表达及其干预措施的实验研究

摘要

第一部分糖尿病肾病及血液透析病人临床有关资料 目的：探讨低分子糖化终末产物(LMW-AGEs)在不同程度的糖尿病肾病患者体内的蓄积情况并观察金芪降糖片配伍胰激态酶原对Ⅲ期糖尿病肾病的治疗作用。 方法：测定非糖尿病人(N)、无肾病的糖尿病人(DM)和不同阶段糖尿病肾病患者(微量白蛋白尿期DN1、临床蛋白尿期DN2、氮质血症期DN3、尿毒症期U)的血清中LMW-AGEs荧光强度。观察了80例Ⅲ期糖尿病肾病患者，其中42例(A组)应用金芪降糖片配伍胰激态酶原治疗，38例(B组)单纯服用胰激态酶原，观察各组用药12周前后糖化血红蛋白A1C(HbA1C)、24小时尿微量白蛋白(UMA)、血清晚期糖化终末产物(advancedglycationendproducts，AGEs)的变化。 结果：1.血清LMW-AGEs荧光强度：N组＜DM组，DN1组＜DN2组，DN3组＜U组，DM与DN1以及DN2与DN3之间差别无显著性；2.用药12周后，A组上述指标均明显下降，B组HbA1C和UMA有明显下降，其余指标较治疗前无明显变化。A、B两组患者治疗后比较，A组患者的Homa-IR、UMA、血清AGEs水平均低于B组患者，差异有显著性，而两组患者的HbA1C水平没有显著性差异。 结论：测定血清LMW-AGEs的水平可以对早期肾损害的诊断、肾损害程度的分析以及终末期肾病的评价提供帮助。金芪降糖片配伍胰激态酶原对早期糖尿病肾病有较好的治疗作用。 第二部分糖尿病大鼠肾皮质AGEs-RAGE系统的表达及其抑制措施的实验研究 目的：观察糖尿病大鼠肾皮质中AGEs、RAGE、NF-KB、TGF-β1、VEGF和CTGF等转录因子和细胞因子的表达及肾组织形态学变化，了解金芪降糖片是否有肾脏保护作用，并对其机制进行初步探讨。 方法：采用RT-PCR、westernblotting等技术观察不同时期(造模后4、12、20周)糖尿病组(DM组)、糖尿病给药组(DD组)和对照组(N组)大鼠肾皮质AGEs、RAGE、NF-KB、TGF-β1、VEGF和CTGF水平，同时观察各组大鼠肾脏形态学改变，评价金芪降糖片的肾保护作用。 结果：1.血糖：DM组(23.47±4.12mmol/l)、DD组(23.31±4.13mol/l)明显高于N组(p＜0.001)，DM组和DD组之间无显著性差别(p＞0.05)。2.AGEs：实验4周，DD、DM、N组肾脏AGEs水平无显著性差异(p＞0.05)；实验12周和20周，DM组AGEs水平高于N组(p＜0.05)，差别有统计学意义，但DM组和DD组之间、DD组和N组之间AGEs水平无显著性差异(p＞0.05)。3.RAGE：实验第4周，DM组RAGE-mRNA水平高于N组(p＜0.05)，但DM组和DD组之间、DD组和N组之间无显著性差异(p＞0.05)；实验第12周和20周,DM组RAGE-mRNA水平高于N组(p＜0.01)和DD组(p＜0.05),DD组和N组之间无显著性差异(p＞0.05)。RAGE蛋白表达水平与RAGE-mRNA一致。4.NF-KB：第4周和第12周，DD、DM、N组NF-κB65表达水平未发现显著性差异(p＞0.05)；实验第20周，DM组NF-κB65表达水平高于DD组(p＜0.05)和N组(p＜0.01)，DD组和N组之间无显著性差别(p＞0.05)。5.VEGF：第四周，各组间VEGF-mRNA和蛋白表达水平无显著性差异(p＞0.05)；实验第12周，DM组VEGF-mRNA和蛋白表达水平均显著性高于N组(p＜0.05；p＜0.01)，但DM组和DD组、DD组和N组之间VEGF-mRNA和蛋白表达水平无显著性差异(p＞0.05)。实验第20周，DM组VEGF-mRNA和蛋白表达水平均显著性高于N组(p＜0.001)和DD组(p＜0.001)，DD组和N组之间无显著性差异(p＞0.05)。6.TGF-β1：实验第4周，DD组TGF-β1-mRNA表达水平显著性高于N组(p＜0.05)，但DD组和DM组、DM组和N组之间TGF-β1-mRNA表达水平无显著性差异(p＞0.05)，而三组间TGF-β1蛋白表达水平则未见显著性差异(p＞0.05)；实验第12周，DM组TGF-β1-mRNA及蛋白表达水平显著性高于N组(p＜0.001；p＜0.01)和DD组(p＜0.001；p＜0.01)，DD组和N组之间TGF-β1-mRNA及蛋白表达水平无显著性差异(p＞0.05)；第20周，DM组TGF-β1-mRNA及蛋白表达水平显著性高于N组(p＜0.001)和DD组(p＜0.001)，DD组TGF-β1-mRNA表达水平显著性高于N组(p＜0.001)但蛋白表达水平与N组无显著性差异(p＞0.05)。7.CTGF：实验第4周，各组大鼠肾脏CTGFmRNA及蛋白表达水平无显著性差异(p＞0.05)；实验第12周，DM组CTGF-mRNA表达水平显著性高于N组(p＜0.001)和DD组(p＜0.05)，但蛋白表达水平未见显著性差异(p＞0.05)，DD组和N组之间CTGF-mRNA及蛋白表达水平无显著性差异(p＞0.05)；实验第20周，DM组CTGF-mRNA及蛋白表达水平显著性高于N组(p＜0.001；p＜0.01)和DD组(p＜0.001；p＜0.01)，DD组和N组之间CTGF-mRNA及蛋白表达水平无显著性差异(p＞0.05)。 结论：1.尾静脉一次注射STZ可以成功制备大鼠糖尿病模型。2.AGEs、RAGE、NF-κB、VEGF、TGF-β1及CTGF与糖尿病肾病的发生和发展有着密切的联系。而RAGE→氧化应激→p21ras/有丝分裂激动蛋白激酶(P21ras/MAPK)→NF-KB可能是联系多种致病因素的纽带，RAGE有可能扮演中枢的角色。3.金芪降糖片可以明显减轻糖尿病慢性肾损伤的程度，可能有潜在的尿毒症预防和治疗作用，金芪降糖片需长期应用才能显现其肾保护作用，而短期应用的效果并不明显。4.金芪降糖片的肾保护作用是独立于血糖因素以外的，估计与其能有效地降低糖尿病肾组织中AGEs、RAGE、NF-κB、VEGF、TGF-β1及CTGF水平有关。

目录

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符号说明

前言

第一部分 糖尿病肾病及血液透析病人临床有关资料—本实验研究的立题依据

第二部分 糖尿病大鼠肾皮质AGEs-RAGE系统的表达及其干预措施的实验研究

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

附图1

附图2

综述一 糖化终末产物受体：多种慢性血管疾病发病的中枢

综述二 中医药防治糖尿病肾病概况

致谢