血小板微颗粒对内皮细胞粘附分子表达的影响

摘要

近年来随着对血小板微颗粒(Platelet microparticles,PMPs)检测技术的提高,PMPs的临床意义逐渐受到重视,而有关PMPs在冠心病心肌缺血与缺血再灌注损伤中的作用也成为研究热点。大多数研究表明冠心病心肌缺血与缺血再灌注损伤时,PMPs的水平升高,而其机制尚未完全清楚。有关PMPs与细胞粘附分子(cell adhesion molecular,CAM)的研究甚少,且研究结果不一致。本实验用PMPs刺激体外培养的人脐静脉内皮细胞(CRL-1730),并测定内皮细胞粘附分子E-seleetin、ICAM-1、VCAM-1mRNA的表达,初步研究了PMPs对内皮细胞粘附因子表达的影响,为进一步研究PMPs在冠心病中可能的作用机制奠定基础。
　　 目的:检测PMPs作用于内皮细胞后细胞粘附分子ICAM-1、VCAM-1、E-selectin的表达,探讨PMPs在冠心病中的作用。
　　 方法：
　　 1.枸橼酸钠抗凝血分离得到血小板微颗粒,并应用流式细胞仪检测其纯度。
　　 2.将分离得到的血小板微颗粒与CRL-1730内皮细胞共培养。第一部分根据加入血小板微颗粒的不同剂量分为五组:0、10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、100μg/ml,每组均设4个复孔,共培养4小时后收集各孔中的细胞。第二部分固定血小板微颗粒的浓度(50μg/ml),根据共培养的不同时间分为三组:2小时、4小时、24小时,每组均设4个复孔,分别在2小时、4小时、24小时收集各孔中的细胞。
　　 3.提取内皮细胞中的RNA,应用半定量逆转录聚合酶链反应技术扩增目的cDNA,测定目的cDNA扩增条带与内参条带的灰度值。
　　 结果：本实验发现,体外培养的内皮细胞(CRL-1730)在基础状态下即可表达一定量的E-selectin、ICAM-1和VCAM-1mRNA。加入不同浓度的PMPs刺激之后,当PMPS达到一定浓度,可促使内皮细胞(CRL-1730)表达E-selectin、ICAM-1和VCAM-1升高,差异有统计学意义(p<0.05)。而PMPs刺激内皮细胞(CRL-1730)不同时间,E-selectin、ICAM-1的表达无差异(p>0.05)。
　　 结论:1.本实验成功制备了纯度较高的PMPs。2.PMPs可促使体外培养的人脐静脉内皮细胞(CRL-1730)表达E-selectin、ICAM-1和VCAM-1升高,从而从一方面解释了PMPs在冠心病中的可能的作用机制。