大鼠肉芽组织内卵巢组织自体移植的实验研究

摘要

目的：目前国内外大量实验研究和初步的临床应用证实通过自体移植卵巢有可能恢复患者生育能力和内分泌功能。然而，移植后缺血缺氧再灌注损伤仍然是阻碍移植卵巢功能恢复的关键因素。Israely等研究发现将卵巢组织移植到伤口愈合过程中的肉芽组织内，能减少组织的缺血损伤时间。本实验将SD雌性大鼠新鲜卵巢组织分别自体移植到下肢根部肌肉内和预制的肌层创面肉芽组织内，并给予外源性促性腺激素，从组织学、新生血管免疫组化等方面进行评价：1)自体异位移植卵巢组织存活的可行性；2)不同时间创面肉芽组织对卵巢组织存活及移植物新生血管生成情况的影响；3)外源性促性腺激素对移植卵巢卵泡发育的影响；通过以上研究探索如何降低卵巢组织移植后的缺血缺氧损伤，为临床提供实验依据。
　　 方法：本实验选用SD雌性大鼠100只，周龄23～27d，体重50～60g。分为五组：第Ⅰ组：移植到下肢根部肌肉内(即对照组)，第Ⅱ组：移植到移植前2天预制的下肢根部肌层创面肉芽组织内；第Ⅲ组：移植到移植前3天预制的下肢根部肌层创面肉芽组织内；第Ⅳ组：移植到移植前4天预制的下肢根部肌层创面肉芽组织内；第Ⅴ组：移植到移植前5天预制的下肢根部肌层创面肉芽组织内。各组双侧卵巢去势后移植到双侧下肢肌肉组织或不同时间预制的肌层肉芽组织内，移植一周后回收单侧移植卵巢，石蜡包埋，5μm连续切片，HE染色，显微镜观察各组移植卵巢卵泡的结构和数量；化学发光法测定各组血清中雌二醇的水平；免疫组化法检测移植卵巢新生血管VEGF，CD31标记血管内皮细胞，计数微血管密度，并观察VEGF和CD31表达的相关性；回收单侧移植卵巢后，给予外源性促性腺激素，观察外源性促性腺激素对异位移植卵巢组织的作用及对移植卵巢卵母细胞的形态及数量的影响。
　　 结果：1.组织学观察异位移植卵巢HE染色，肉芽组织各组原始卵泡数显著高于肌肉组，有统计学意义(P<0.05)。3天肉芽组织组中原始卵泡计数最高，与2、5天肉芽组织内比较有统计意义(P<0.05)。2.雌二醇检测结果卵巢移植后一周在给予外源性促性腺激素前及之后，2、3、4天肉芽组织各组雌二醇水平高于肌肉组，有统计学意义(P<0.05)。3天肉芽组织组中雌二醇最高，与2、4、5天肉芽组织内比较有统计意义(P<0.05)。3.免疫组化检测结果(1)VEGF阳性细胞数：3、4天肉芽组织内VEGF表达显著高于肌肉组，有统计学意义(P<0.05)；3天肉芽组织内VEGF表达最高，与其余组比较有统计学意义(P<0.05)。(2)MVD值：2、3、4天肉芽组织内MVD值较肌肉组高，有统计学意义(P<0.05)。(3)VEGF和CD31表达相关性分析：移植物中VEGF表达与MVD值之间呈正相关关系(r=0.493，P<0.01)。4.卵母细胞检测结果所有移植物中均可分离到卵母细胞。3天肉芽组织内卵母细胞数较肌肉组高，有统计学意义(P<0.05)。肌肉组中均为GV期，未发现MⅡ期卵母细胞。肉芽组织组中不但可分离到GV期卵母细胞，还可见卵母细胞生发泡破裂或MⅡ期卵母细胞。
　　 结论：1.卵巢组织异位移植后可以恢复卵巢甾体激素的分泌功能和卵泡生长发育。2.肉芽组织组VEGF和CD31的表达较肌肉组升高，且在3天肉芽组织内表达达到最高值，推测在移植卵巢前3天在移植部位作手术创面，可以显著增加移植部位的新生血管。3.外源性的促性腺激素能促进异位移植卵巢卵母细胞的成熟和发育，卵母细胞形态未见异常。4.肉芽组织各组中发现有MⅡ期卵母细胞，而肌肉组中未见，推测肉芽组织内的环境可能更有利于异位卵巢的生长和卵母细胞的发育。