塞来昔布对体外幽门螺杆菌诱导GES-1转化细胞抑制作用的研究

摘要

目的:
　　 体外培养幽门螺杆菌(Hp)诱导人永生性胃上皮细胞株(GES-1)转化细胞;研究选择性环氧合酶2（COX-2）抑制剂塞来昔布对Hp诱导的GES-1转化细胞是否具有抑制增殖、诱导凋亡的作用，为塞来昔布应用于胃癌的预防提供实验基础和理论依据。
　　 方法:
　　 1、在体外将幽门螺杆菌悉尼株(SS1)与GES-1细胞按1∶1共培养2个月，用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、平板克隆形成实验检测细胞转化情况，培养GES-1转化细胞;
　　 2、用不同浓度(0，25，50，75，100，125，150μmol/L)的塞来昔布作用于GES-1转化细胞24h，48h，72h，MTT法筛选合适浓度范围并检测其对GES-1转化细胞增殖能力的影响，用合适浓度范围内不同浓度的塞来昔布作用于GES-1转化细胞后，分别利用免疫细胞化学法检测Ki-67、Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率观察塞来昔布对GES-1转化细胞的增殖及凋亡的影响。
　　 结果:
　　 1、相差显微镜下，GES-1细胞与Hp(SS1)共同培养2个月后细胞出现形态学变化，表现为细胞大小不等，形状不规则，细胞体积增大，偶见巨细胞，形态不规则，细胞核增大，核仁增多，出现病理核分裂象，也可见少量漂浮细胞，我们称之为GES-1转化细胞。
　　 2、MTT法检测GES-1转化细胞24h、48h、72h的OD值分别为0.255±0.006，0.347±0.078，0.727±0.096，均高于GES-1对照细胞(0.225±0.014，0.245±0.041，0.490±0.046)，差异均有统计学意义。
　　 3、GES-1转化细胞克隆形成数(52.67±10.29)及克隆形成率(26.3％)均高于GES-1对照细胞(27.17±8.47，13.6％)，差异有统计学意义(t=4.687，P=0.001)。
　　 4、用不同浓度(0，25，50，75，100，125，150μmol/L)的塞来昔布作用于GES-1转化细胞24h，48h，72h，MTT法筛选显示:作用时间为24h时塞来昔布合适浓度范围在[75，100]μmol/L，作用时间为48h时塞来昔布合适浓度范围在[50，100]μmol/L，作用时间为72h时塞来昔布合适浓度范围在[25，100]μmol/L，且随着塞来昔布浓度(50、75、100μmol/L)的增加，塞来昔布对转化细胞增殖的抑制率升高，呈剂量依赖性，差异有统计学意义。
　　 5、终浓度分别为0、50、75、100μmol/L的塞来昔布作用于GES-1转化细胞48h后，用免疫细胞化学法检测其Ki-67表达量逐渐减少，分别为(13.374±2.084)％,(9.974±2.169)％,(7.014±2.328)％,(3.907±1.896)％，差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　 6、终浓度分别为0、50、75、100μmol/L的塞来昔布作用于GES-1转化细胞48h后，Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率逐渐增高，分别为(5.242±2.139)％,(23.098±9.436)％,(39.616±12.405)％,(64.342±8.403)％,差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 结论:
　　 1、幽门螺杆菌长期作用于胃上皮细胞，细胞形态会发生改变，出现增殖能力增强，并可以诱导其转化。
　　 2、塞来昔布可抑制GES-1转化细胞的增殖，并促进其凋亡，并具有浓度依赖性，揭示了塞来昔布对GES-1转化细胞的作用，为今后塞来昔布应用于临床延缓胃癌的发生提供实验依据。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

流程图

一、Hp体外诱导GES-1细胞转化

1．1 对象和方法

1．1．1 研究对象

1．1．2 主要仪器设备

1．1．3 主要试剂

1．1．4 主要试剂溶液的配制

1．1．5 实验方法

1．1．6 结果判定

1．1．7 统计学分析

1．2 结果

1．2．1 Hp的培养

1．2．2 GES-1细胞与Hp共同培养后形态学改变

1．2．3 MTT检测增殖能力

1．2．4 平板克隆形成实验

1．3 讨论

1．4 小结

二、塞来昔布对GES-1转化细胞增殖和凋亡能力的影响

2．1 对象与方法

2．1．1 研究对象

2．1．2 主要仪器设备

2．1．3 主要试剂

2．1．4 主要试剂溶液配制

2．1．5 实验方法

2．1．6 结果判定

2．1．7 统计学分析

2．2 结果

2．2．1 MTT检测结果

2．2．2 免疫细胞化学法检测Ki-67表达情况

2．2．3 Annexin V-FITC／PI双染色法检测细胞凋亡结果

2．3 讨论

2．4 小结

结论

参考文献

在学期间发表论文

综述 胃癌前病变病因及治疗的研究现状

致谢