EGFR/STAT3信号途径阻断对胃癌细胞淋巴生成相关因子表达及细胞生物学特点的影响研究

摘要

研究目的:
　　 采用单克隆抗体阻断EGFR的激活，调节其下游调控基因STAT3的表达，进而抑制胃癌细胞对于淋巴生成相关因子(VEGF-C，VEGF-D)的表达。以证实单克隆EGFR抗体对于胃癌淋巴结转移发生发展的抑制作用，并分析EGFR/STAT3信号途径阻断对于何种分化程度的胃癌细胞生物学性质改变显著，对不同分化程度胃癌患者肿瘤的诊断、治疗和预后判断起指导作用。
　　 研究方法:
　　 1.选取常见的不同分化程度人胃癌细胞株MKN-28(高分化)、SGC-7901（中分化）、MGC-803(低分化)及人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1（对照），进行细胞传代、培养;
　　 2.流式细胞术及RT-PCR检测不同分化程度胃癌细胞株EGFR表达水平;
　　 3.对于EGFR单克隆抗体(Nimotuzumabinjection，商品名:泰新生)处理前后，免疫组化及RT-PCR法分别检测STAT3、p-STAT3、VEGF-C、VEGF-D在不同分化胃癌细胞株[MKN-28(高分化)、SGC-7901（中分化）、MGC-803（低分化）及人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1（对照）]中的蛋白及mRNA表达变化;
　　 4.检测应用EGFR单克隆抗体（泰新生）处理前后不同分化程度胃癌细胞的细胞凋亡（流式细胞术检测）、细胞增殖(MTT法检测)、细胞侵袭(Transwell小室检测)、细胞周期（流式细胞术检测）方面的细胞生物学特性;
　　 5.数据分析采用SPSS17.0统计软件进行处理，p＜0.05作为差异有统计学意义。
　　 结果:
　　 1.流式细胞术及RT-PCR检测结果均显示:人胃癌细胞株EGFR呈现高表达，不同胃癌细胞株EGFR的表达程度为MGC-803(低分化)＞SGC-7901（中分化）＞MKN-28(高分化)，胃癌细胞分化程度越低，EGFR表达越强(p＜0.05)。
　　 2.EGFR的表达和STAT3、VEGF-C、VEGF-D的表达变化趋势同步，且表达有相关性。
　　 3.胃癌细胞STAT3、p-STAT3、VEGF-C、VEGF-DmRNA及蛋白的表达，在EGFR单克隆抗体药物处理组较未行药物处理组显著减弱(p＜0.05)。
　　 4.单克隆EGFR抗体药物处理后，胃癌细胞增殖减慢、细胞凋亡加快、细胞侵袭性减弱、细胞周期停滞，药物处理前后有统计学差异(p＜0.05)。
　　 结论:
　　 1.人胃癌细胞株EGFR高表达，胃癌细胞分化程度越低，EGFR的表达越强。
　　 2.单克隆EGFR抗体抑制胃癌细胞STAT3、p-STAT3、VEGF-C、VEGF-DmRNA及蛋白的表达。
　　 3.单克隆EGFR抗体抑制胃癌细胞增殖、促进胃癌细胞凋亡、降低胃癌细胞的侵袭性、使胃癌细胞周期停滞。
　　 4.EGFR/STAT3信号传导途径阻断后，胃癌细胞分化程度越低，胃癌细胞生物学性质改变越显著。

目录

声明

摘要

缩略语

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

对象和方法

1．1 实验材料

1．1．1 细胞系

1．1．2 主要实验试剂

1．1．3 主要仪器设备

1．1．4 基本溶液的配制

1．2 实验方法

结果

2．1 细胞系的培养

2．2 细胞株EGFR的表达

2．3 RT-PCR检测STAT3、VEGF-C、VEGF-D mRNA表达结果

2．4 免疫组化结果

2．5 细胞增殖检测结果

2．6 细胞侵袭结果

2．7 细胞凋亡结果

2．8 细胞周期结果

讨论

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述 胃癌与EGFR／STAT3信号传导通路研究进展

致谢