泌尿生殖道沙眼衣原体感染者血清抗衣原体免疫优势蛋白抗体的检测

摘要

沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，C.t）引起的泌尿生殖道感染是近年来国内外最常见的性传播疾病，目前全球范围每年近10亿人被临床诊断为衣原体感染。多数衣原体生殖道感染初期症状轻微、病情隐匿、难于被发现，感染常常持续存在，最终导致严重的并发症，如女性不孕、异位妊娠，男性前列腺炎、附睾炎等。大约70％～90％的女性感染者和50％～70％的男性感染者是没有症状的，他们长期携带衣原体，成为重要储主和传染源。这就解释了泌尿生殖道沙眼衣原体感染在全世界持续流行的根源。
　　为控制沙眼衣原体感染，早期发现沙眼衣原体感染者并给与治疗，防止进一步传播是重要举措之一。但是，目前我国使用的衣原体检测试剂并不适合早期筛查。现有检测试剂的抗原蛋白是衣原体主要外膜蛋白(major outer membraneprotein，MOMP)或者热休克蛋白60（chlamydial heat shock protein60，Hsp-60），近几年的研究显示，这两种蛋白的抗原性都不够强。
　　本实验选取了几种近年来国外陆续报道的沙眼衣原体免疫优势蛋白进行蛋白的表达、验证，以Hsp-60为对照，收集临床沙眼衣原体感染者和未感染者的血清，ELISA方法检测血清中抗所表达衣原体抗原的抗体，寻找适用于国内早期筛查泌尿生殖道沙眼衣原体感染者的抗原蛋白。
　　目的:表达三种沙眼衣原体免疫优势蛋白，以热休克蛋白60为对照，验证表达蛋白的抗原性，探索适合于早期筛查衣原体感染者的抗原物质。
　　方法:将编码衣原体质粒编码蛋白3(Pgp3)、外膜蛋白复合物B蛋白C端肽(OmcBc)、ct841编码蛋白(CT841)和热休克蛋白60(Hsp-60)四种基因的重组质粒和空质粒转化入大肠杆菌，IPTG诱导表达，并用谷胱甘肽磁珠进行纯化后包被ELISA孔板。收集天津医科大学总医院性病门诊泌尿生殖道沙眼衣原体感染者和未感染者的血清各20份。ELISA方法检测血清中上述几种蛋白的抗体。
　　结果:20份沙眼衣原体感染者血清中Pgp3、OmcBc、CT841和Hsp-60抗体的检出率分别是14例(70％)、9例(45％)、8例(40％)、5例(25％)。20份无沙眼衣原体感染者的血清中，1例只检测到Hsp-60抗体，其余均无上述4种蛋白抗体的存在。
　　结论:上述四种衣原体蛋白中，Pgp3的抗原性最强，抗体检出率最高;Hsp-60的抗原性最弱，抗体检出率最低。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、沙眼衣原体免疫优势蛋白抗体的表达

1．1 对象

1．1．1 重组质粒、菌株

1．1．2 试剂、仪器及耗材

1．2 方法

1．2．1 重组质粒的转化、筛选、提取和测序

1．2．2 融合蛋白的表达、纯化及鉴定

1．3 结果

1．3．1 重组质粒转化

1．3．2 重组质粒的提取

1．3．3 重组质粒测序和blast比对

1．3．4 融合蛋白表达及纯化

二、泌尿生殖道沙眼衣原体患者血清中抗体的检测

2．1 对象

2．1．1 收集标本

2．1．2 试剂、耗材及仪器

2．2 方法

2．2．1 标本采集与处理

2．2．2 ELISA方法检测蛋白抗原性

2．2．3 结果判断

2．3 结果

2．3．1 OD值及标准差

2．3．2 实验结果

三、讨论

3．1 对Hsp-60和pgp3、OmcBc、CT841的抗原性讨论

3．2 实验方法的讨论

3．2．1 GST Magbeads纯化、鉴定融合蛋白的讨论

3．2．2 血清处理方法的讨论

3．2．3 谷胱甘肽包被的ELISA 96孔酶标板的使用

四、结论

参考文献

沙眼衣原体免疫优势蛋白的研究进展

致谢