旋覆花来源的新倍半萜内酯类化合物JEUD-38抑制RAW264.7细胞产生NO的作用及机理

摘要

目的：
　　已证实旋覆花属植物在抗肿瘤、抗炎、抑菌、预防肝炎及预防和治疗糖尿病等方面都具有较好的生物活性，具有很高的药用价值。通过前期的研究工作，我们从旋覆花中分离得到了21个单体化合物，其中JEUD-38（1-oxo-4αH-eudesma-5(6),11(13)-dien-12,8β-olide）是一个新的倍半萜内酯类化合物。通过前期的抑制一氧化氮（nitric oxide，NO）生成实验筛查证实JEUD-38具有抑制 NO生成的活性，是具有抗炎性质的化合物。利用小鼠巨噬细胞RAW264.7进行体外实验研究该化合物的抑制NO生成的分子作用机制。作用机制包括JEUD-38对诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）的表达、核转录因子-κB（nuclear factor-kappa B，NF-κB）活性和丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）的磷酸化等。
　　方法：
　　采用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞建立炎症反应模型。
　　1.利用MTT实验研究JEUD-38对RAW264.7细胞的细胞毒性作用，确定化合物的细胞毒性浓度。
　　2.利用Griess法研究JEUD-38对NO的抑制作用，检测NO的释放量。
　　3.利用Western blot方法研究JEUD-38对LPS诱导的RAW264.7细胞的抗NO作用机制：检测iNOS以及其上游的两个蛋白通路：NF-κB通路和MAPKs通路中关键信号转导分子的磷酸化水平。
　　结果:
　　JEUD-38显示出抗炎的特性，能够显著减少LPS诱导的NO产生，并以浓度依赖的方式抑制LPS诱导的iNOS的蛋白表达。作用机制研究中发现，JEUD-38能够抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中NF-κB的活性，其作用是通过抑制抑制因子-κB-α（inhibitory factor-κB-α，IκB-α）的磷酸化和降解实现的。同时JEUD-38抑制 LPS刺激的MAPKs通路且显示出浓度依赖的抑制效果，包括胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2），c-Jun N-末端激酶（JNK）和p38。
　　结论:
　　这些结果表明，JEUD-38是通过抑制NF-κB和MAPK的活性，而抑制iNOS的表达，进而抑制NO产生。提示JEUD-38在预防和治疗炎症方面有潜在的应用价值，有望成为治疗炎症疾病的候选药物。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

对象和方法

1.1 植物来源

1.2 细胞系

1.3 主要试剂和药品

1.4 主要仪器设备

1.5 实验准备

1.6实验方法

结果

2.1 JEUD-38的结构

2.2 JEUD-38对RAW264.7细胞的细胞毒作用

2.3 JEUD-38对LPS诱导的NO产生和iNOS蛋白表达的影响

2.4 JEUD-38对LPS诱导的NF-?B的作用机制研究

2.5 JEUD-38对LPS诱导的MAPK通路作用机制研究

讨论

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述: 非甾体抗炎药的研究进展

致谢