PAPP-A均相化学发光检测方法的建立和在ACS诊断中的初步应用

摘要

目的：
　　新近研究发现PAPP-A是冠状动脉粥样斑块不稳定性的炎性生物标志物之一，血清PAPP-A的升高变化对急性冠脉综合征的早期诊断及预后具有一定价值。与孕妇血清PAPP-A不同，非孕血清中的PAPP-A以低水平存在，而目前使用的PAPP-A检测方法灵敏度较低，不适用非孕血清的检测。本研究采用活性氧传递免疫分析技术方法，建立适合检测ACS患者血清超敏PAPP-A水平的定量分析体系,评价分析方法的各项性能指标。在此基础上对ACS患者标本分组检测，实验研究在急性冠状动脉综合征患者血清中，PAPP-A是否对ACS具有较好的预测作用，对此类疾病危险分层和预后评估的价值。
　　方法：
　　制备生物素化PAPP-A抗体和抗体包被的受体微球，以双抗体夹心法与血清中PAPP-A结合，以光激化学发光分析方法检测PAPP-A浓度。通过改变加样模式、加样顺序，调整试剂比例和反应时间温度等方面，优化检测方法的反应条件。利用ELISA Cale软件建立四参数拟合方程的标准曲线，初步建立PAPP-A均相化学发光免疫检测方法。同时评价均相化学发光分析检测PAPP-A方法的灵敏度、精密度、准确性、稳定性等各项性能指标，初步推算正常人的参考范围。根据病程进展对急性冠脉综合征患者进行分组研究，比较各组 ACS患者与对照组的PAPP-A水平有何差别，同时与其它ACS相关的指标进行分析，初步探讨PAPP-A与ACS之间的临床相关性。
　　结果：
　　确定PAPP-A检测方法：在96孔板中加入25ul生物素化抗体（1:2000），25ul受体球（1:100），25ul样本，于37℃孵育30min，避光条件下加入175ul供体微球，于37℃孵育10min测定信号值。此PAPP-A检测方法灵敏度为0.55mU/L，回收率在95％-100%；线性、稳定性及特异性良好；重复性：批内变异系数（CV）小于10%，批间CV小于15%；选择血红蛋白、甘油三酯和胆红素三种常见干扰因素对此检测方法的干扰较小。采用时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）与本实验建立的均相化学发光法检测30例（10例心梗患者，20例孕妇）血清标本，二者进行相关分析（r2=0.988，P<0.05）。检测104例健康体检者（男/女：43/61，年龄：24-69岁）血清PAPP-A水平，初步推算参考范围为1.60—25.12mU/L。
　　结论：
　　本实验建立了一种适用于ACS患者以均相化学发光免疫分析技术检测血清低妊娠相关血浆蛋白A水平的方法。我们所建立的超敏PAPP-A检测方法准确性好，灵敏度、回收率、特异性较高，与时间分辨荧光免疫方法的相关性较高，通过检测小样本量健康人群的血清PAPP-A水平为其参考范围的确定提供了一定的依据，评价了此方法应用于临床检测的可行性。分析了各组间ACS影响因素的差异，对ACS相关的炎性指标进行讨论，并比较其相关性，初步讨论了超敏PAPP-A的检测在冠脉综合征患者中的分层评估的应用价值，而其作用机制及对ACS分层和预测的标准还需要进一步研究和探索。

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缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、超敏PAPP-A均相化学发光免疫检测方法的建立

1. 实验材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

2. 实验结果

2.1 生物素化抗体与受体微球的最适反应浓度

2.2 供体微球的加样量

2.3 反应时间

2.4 反应温度

2.5 适合的样本稀释度

2.6 PAPP-A检测方法

2.7 标准曲线

2.8 方法学评价

3 讨论

3.1 血清PAPP-A在ACS诊断中的价值

3.2 检测PAPP-A的现有方法

3.3 化学发光免疫分析技术

3.4 均相化学发光方法检测超敏PAPP-A的特点

二、血清PAPP-A水平在ACS诊断中的初步应用

1. 研究对象与研究方法

1.1 研究对象

1.2 方法

2. 结果

2.1. 一般临床指标分析

2.2 各组ACS相关生物标志物的分析

2.3 PAPP-A与LP- PLA2相关性分析

2.4 PAPP-A与hs-CRP的相关性分析

3.讨论

3.1 急性冠脉综合征的病理基础

3.2 急性冠脉综合征的炎性标志物

3.3 急性冠脉综合征的其他影响因素

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述: 与急性冠脉综合征相关生物标志物的研究进展

致谢