人胶质瘤中EGFRvⅢ及其外分泌表达谱的调控机制研究

摘要

目的:
　　1.构建 U87EGFRvIII与 wtU87混合培养模型，在不同比例的模型中验证EGFRvIII的促生长作用及其详细分子机制；进一步在体内实验和体外实验中验证 EGFRvIII对胶质瘤异质性的驱动作用，为胶质瘤的靶向治疗提供新的途径。
　　2.通过 F25P preproinsulin与信号肽酶 Spase的特异性结合，从而干扰U87EGFRvIII细胞中内质网上外分泌蛋白的合成与装配过程，抑制U87EGFRvIII细胞对周围细胞的生长支持作用，为靶向治疗 EGFRvIII阳性胶质瘤提供新思路。
　　3.通过干扰内质网上信号肽肽酶SPP及分析其外分泌表达谱，阐明SPP在胶质瘤进展中的分子机制。
　　方法：
　　1.通过临床标本的不同位点取材，免疫组织化学方法检测不同位点 EGFRvIII, EGFR, Ki-67, STAT3，NF-KB, EZH2，PKM2的表达水平变化。
　　2.用U87EGFRvIII与wtU87混合培养，MTT及细胞克隆形成实验方法检测不同混合比例水平的增殖变化；Western blot方法检测STAT3，NF-KB, EZH2， PKM2的表达水平变化。
　　3.构建胶质瘤颅内原位模型，研究不同比例EGFRvIII的促肿瘤生长效果。
　　4.利用含F25P preproinsulin的慢病毒处理U87EGFRvIII，分析其上清液对胶质瘤细胞U87, LN229和U251的表型及功能的影响。
　　5.构建胶质瘤颅内原位动物模型，使用DOX诱导，检测F25P preproinsulin的体内抑瘤效果。
　　6.用表达si-HM13的慢病毒处理U87EGFRvIII细胞，分析其上清液中外分泌蛋白的表达谱及其对U87, LN229和U251细胞表型及功能的影响.
　　7.构建胶质瘤颅内原位动物模型，检测si-HM13的体内抑瘤效果。
　　结果：
　　1.胶质瘤同一标本中不同位点EGFRvIII, EGFR, Ki-67, STAT3，NF-KB, EZH2， PKM2的表达存在显著异质性。
　　2.不同比例 U87EGFRvIII与 wtU87混合培养细胞的增殖速率明显不同， U87EGFRvIII比例为30%时增殖速率达到平台期。
　　3.体内实验证实EGFRvIII对胶质瘤的生长有驱动作用。
　　4.含F25P preproinsulin慢病毒处理的U87EGFRvIII的上清液对U87, LN229和U251的表型及功能改变有明显的影响。
　　5.胶质瘤颅内模型证实诱导表达F25P preproinsulin能抑制胶质瘤的生长。
　　6. si-HM13慢病毒处理的 U87EGFRvIII细胞的外分泌表达谱变化明显，其中TGF-β1变化最为显著。
　　7.体内实验证实Lenti-si-HM13能显著降低小鼠血液中TGF-β1和 TGF-α的含量及抑制肿瘤的生长。
　　结论：
　　1.胶质瘤内存在明显的异质性，EGFRvIII对胶质瘤的生长有驱动作用。
　　2. F25P preproinsulin能特异性结合信号肽酶Spase,影响EGFRvIII的外分泌蛋白合成。
　　3.体内外研究显示诱导表达F25P preproinsulin能抑制胶质瘤的生长和转移。
　　4. Lenti-si-HM13能影响胶质瘤EGFRvIII细胞外分泌蛋白在内置网上的合成与装配，进而引起其表达谱的改变。
　　5.敲低HM13的表达能在小鼠体内抑制胶质瘤的进展。

目录

声明

缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、 EGFRvIII在胶质瘤异质性维持和胶质瘤进展中起驱动作用。

1.1实验对象和实验方法

1.2实验结果

1.3讨论

1.4小结

二、F25P preproinsulin通过干扰EGFRvIII细胞中生长因子合成的方式抑制胶质瘤的生长

2.1实验对象和方法

2.2实验结果：

2.3讨论

2.4小结

三 敲低HM13改变EGFRvIII细胞外分泌表达谱及抑制肿瘤生长

3.1实验对象和方法

3.2实验结果：

3.3 实验讨论

3.4 实验小结

全文结论

1. 胶质母细胞瘤内存在异质性且EGFRvIII在异质性的维持和胶质瘤进展中起驱动作用。

2、 F25P preproinsulin能特异性结合U87EGFRvIII细胞中信号肽酶且在体内体外抑制胶质瘤的进展。

3、 敲低HM13能改变U87EGFRvIII细胞外分泌表达谱且在体内和体外抑制胶质瘤生长。

4. F25P preproinsulin和HM13有望成为胶质瘤治疗的小分子药物和基因治疗的新靶标。

论文创新点

1、选题前沿、切入点好

2、研究方法新颖

3、以临床大样本为依托，注重转化医学

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述：EGFRvIII免疫治疗研究进展

致谢

个人简历