雷公藤甲素通过JAK2/STAT3通路改善糖尿病肾病足细胞损伤的研究

摘要

糖尿病肾病（Diabetic kidney disease，DKD）是糖尿病（Diabetes mellitus，DM）的主要的微血管病变之一。但如今DKD的发病机制仍然未被完全阐释明确。有相关文献报道持续的低度炎症反应，对DKD的发生与发展起非常重要的作用。其中有研究表明JAK2/STAT3信号通路也参与了DKD的演变。近年来发现雷公藤多苷（Tripterygium Wilfordii Polyglycosides，TWP）具有降低DKD患者尿蛋白水平的作用，然而其毒性限制了在临床上的广泛应用。因此，寻找雷公藤多苷的活性单体形式变得迫不及待。本研究提取雷公藤多苷其中一种活性单体“甲素”，在课题组前期动物实验的基础上，应用小鼠永生足细胞系为研究对象，以雷公藤甲素（Triptolide，TP)作为干预药物，探讨雷公藤甲素在高糖状态下对足细胞的保护作用及对JAK2/STAT3信号通路的影响及其可能机制。 本研究以小鼠肾小球永生足细胞为研究对象。足细胞分组：正常对照组（NG组：无糖RPMI-1640培养基包含5.5mmol/L葡萄糖），甘露醇组（MA组：无糖RPMI-1640培养基包含5.5mmol/L葡萄糖和甘露醇24.5mmol/L），高糖组（HG组：无糖RPMI-1640培养基包含30mmol/L葡萄糖）和高糖+雷公藤甲素组（HG+TP组：无糖RPMI-1640培养基包含30mmol/L葡萄糖+雷公藤甲素3ng/ml）。将培养后的足细胞以上述分组方式进行干预，所有实验组将培养24h或48h。然后收集干预后的足细胞进行体外实验。将通过实时定量PCR及免疫印迹western blot等方法检测足细胞特异性指标nephrin及podocin，以及JAK2/STAT3通路上炎症因子的表达情况。 通过上述实验得到了如下结果：(1)qPCR法检测足细胞JAK2、STAT3、ICAM-1和IL-6的mRNA表达量：HG组足细胞ICAM-1和IL-6mRNA表达较NG组明显升高（P＜0.05），TP组足细胞ICAM-1和IL-6mRNA表达较HG组显著降低（P＜0.05），总的JAK2、STAT3的mRNA水平表达量各组间无差异（P＞0.05）。 (2)qPCR法检测足细胞podocin和nephrin的mRNA表达量：HG组足细胞nephrin和podocin mRNA表达较NG组明显降低（P＜0.05），TP组足细胞nephrin和podocin mRNA表达较HG组显著升高（P＜0.05）。 (3)Western Blot法检测足细胞p-STAT3、p-JAK2、ICAM-1和IL-6的蛋白表达：HG组足细胞p-STAT3、p-JAK2、ICAM-1和IL-6的蛋白表达较NG组明显升高（P＜0.05），TP组足细胞p-JAK2、p-STAT3、IL-6和ICAM-1蛋白表达较HG组显著降低（P＜0.05）。 (4)Western Blot法检测足细胞podocin和nephrin的蛋白表达：HG组足细胞nephrin和podocin的蛋白表达量较NG组明显降低（P＜0.05），TP组足细胞nephrin和podocin蛋白表达较HG组显著升高（P＜0.05）。 进而可得到如下结论：(1)高糖诱导能够导致足细胞损伤，表现为足细胞特异性指标podocin及nephrin的表达显著下降。 (2)通过雷公藤甲素的干预，受损的足细胞能够得到一定程度的修复，表现为podocin及nephrin的表达明显改善。 (3)通过对JAK2/STAT3炎症通路的检测，高糖能够激活此通路，使JAK2、STAT3、IL-6、ICAM-1的表达升高，加入雷公藤甲素后可部分抑制JAK2/STAT3通路的表达，进而发挥足细胞的保护作用。

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