PD-1/PD-L1在PTCL中的表达特征及其促进肿瘤细胞免疫逃逸的新型调控机制初步研究

摘要

目的： 本研究的目的在于揭示外周T细胞淋巴瘤（PTCL）患者外周血中sPD-L1水平及PTCL患者肿瘤组织中PD-L1、PD-1、p-Erk表达与临床特征和预后的关系，进一步揭示PD-L1与PD-1，p-Erk表达之间的相关性，初步探索PD-1/PD-L1通路是否可直接激活PTCL肿瘤内在Ras/Raf/Erk癌基因信号通路。以此探讨PTCL免疫逃逸的新型发病机制，并为PTCL患者免疫治疗的联合策略提供新思路。 方法： 采用ELISA方法检测正常人群与PTCL患者外周血中sPD-L1水平。收集PTCL患者病例资料，分析患者外周血中sPD-L1水平与临床特征之间的关系。同时对患者疗效进行评估，采用SPSS23软件分析PTCL患者外周血中sPD-L1水平与患者疗效的关系。此外，采用多色免疫荧光检测PTCL患者组织中PD-L1、PD-1和p-Erk的表达，分别分析患者组织中PD-L1、PD-1和p-Erk表达与临床特征之间的关系。对患者进行随访，采用GraphPad Prism软件分别分析PTCL患者组织中PD-L1、PD-1和p-Erk表达对患者生存的影响，进一步分析PTCL患者组织中PD-L1、PD-1共表达，PD-L1、p-Erk共表达关系及对患者生存的影响。选取五株PTCL细胞系，采用western blot和流式细胞仪分别检测PTCL细胞PD-L1总表达和膜上表达。并用人重组PD-1多肽刺激高表达PD-L1的PTCL细胞，分别在0h、0.5h、1h、2h，检测PTCL细胞系内Erk总蛋白和其磷酸化水平的变化。 结果： 收集了2010年1月至2015年1月天津医科大学肿瘤医院收治的41例PTCL患者。ELISA方法检测PTCL患者外周血中sPD-L1水平发现，患者sPD-L1水平显著高于正常人群（P＜0.05）。PTCL患者外周血中sPD-L1水平与患者的年龄、临床分期、LDH和β2微球蛋白水平有关，且差异具有统计学意义（P＜0.05）；sPD-L1水平与患者性别、IPI评分和病理分型无明显相关性。疗效分析显示，sPD-L1低表达组疗效显著优于sPD-L1高表达组（P=0.022）。另外，还收集了2008年1月-2015年1月天津医科大学肿瘤医院收治的76例初诊PTCL患者的石蜡组织。多色免疫荧光结果显示，PTCL组织中PD-1、PD-L1和p-Erk皆高表达，其阳性率分别为48.7%、53.9%、53.9%，其中PD-1、PD-L1共表达率为26.3%，PD-L1和p-Erk共表达率为35.5%。Spearman相关性分析显示，PD-1与PD-L1表达无显著相关性(R=0.002，P=1.000)，PD-L1与P-Erk表达存在显著相关性(R=0.259，P=0.037)。PD-1表达与患者临床分期和β2微球蛋白水平相关，而与患者性别、年龄、LDH、和病理分型无关。PD-L1与p-Erk的表达均与患者临床分期相关，而与患者性别、年龄、LDH、β2微球蛋白和病理分型无关。Kaplan-Meier生存分析分别显示PD-1和PD-L1阳性表达患者较阴性表达患者预后差，差异具有统计学意义（P＜0.05）。而PD-1和PD-L1共表达患者较二者双阴性和单阳性表达组更差，差异有统计学意义（P=0.0021）。同样的，PD-L1和p-Erk阳性表达患者分别较二者阴性表达患者预后也差，差异具有统计学意义（P＜0.05）。PD-L1和p-Erk共表达患者较二者双阴性和单阳性表达组更差，差异有统计学意义（P=0.0044）。Western blot和流式细胞仪检测结果显示五株PTCL细胞系皆高表达PD-L1总蛋白和膜蛋白。经人重组PD-1多肽刺激五株细胞0h、0.5h、1h、2h后不同细胞系内Erk的磷酸化水平均有不同程度的升高。 结论： 1.PTCL患者外周血中sPD-L1水平高于正常健康人群，PTCL患者外周血中sPD-L1水平与患者的年龄、临床分期、LDH和β2微球蛋白水平有关；且外周血中sPD-L1高表达组PTCL患者短期疗效显著差于低表达组PTCL患者。 2.PTCL患者组织中PD-1、PD-L1和p-Erk均高表达，其表达与患者临床分期相关，另外PD-1表达还与患者β2微球蛋白水平相关；PTCL患者组织中PD-1和PD-L1共表达率为26.3%，但二者表达无显著相关性，PD-1和PD-L1阳性表达组患者预后分别较二者阴性表达组患者差，差异具有统计学意义；PD-1和PD-L1共表达组患者预后较二者双阴性和单阳性表达组更差，差异具有统计学意义。PTCL患者组织中PD-L1和p-Erk共表达率为35.5%，二者表达存在显著相关性；PD-L1和p-Erk阳性表达组患者预后分别较二者阴性表达组患者差，差异具有统计学意义；PD-L1和p-Erk共表达组患者预后较二者双阴性和单阳性表达组更差，差异具有统计学意义。 3.PD-1/PD-L1通路可能直接激活PTCL细胞系内在Ras/Raf/Erk癌基因信号通路。

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