声明
第1章 文献综述
1.1β-1, 4-半乳糖基转移酶
1.1.1 β-1, 4-半乳糖基转移酶基因家族的发现
1.1.2β-1, 4-半乳糖基转移酶的特性
1.1.3β-1, 4-半乳糖基转移酶的功能
1.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）简介
1.2.1 PRRS 流行病学简介
1.2.2 病原学简介
1.3 糖基化与病毒感染
1.3.1 蛋白糖基化对病毒的影响
1.3.2 病毒感染细胞后蛋白的糖基化及其功能变化
1.4 糖基化修饰在PRRSV 致病与免疫机制中具有重要作用
1.5 本课题的研究意义
第2章 猪源抗病毒基因(pB4GALT5)筛选及鉴定
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 细胞与病毒
2.2.2 主要试剂
2.3 实验方法
2.3.1 3D4/21 细胞培养
2.3.2 转录组测序
2.3.3 荧光定量PCR 鉴定基因转录水平变化
2.3.4 流式细胞术鉴定基因蛋白水平变化
2.4 实验结果
2.4.1 转录组测序数据分析
2.4.2 pB4GALT5 转录水平变化鉴定
2.4.3 pB4GALT5 蛋白水平变化鉴定
2.5 分析与讨论
2.5.1 PRRSV 感染引起宿主基因差异表达
2.5.2 PRRSV 感染影响pB4GALT5 胞内表达
2.6 本章小结
第3章 猪源抗病毒基因(pB4GALT5)克隆及表达
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 实验动物、细胞、载体、菌株
3.2.2 主要试剂
3.3 实验方法
3.3.1 细胞复苏与培养
3.3.2 Total RNA提取及去基因组DNA反转录
3.3.3 基因克隆
3.3.4 猪B4GALT5 胞外蛋白表达
3.3.5 鼠抗猪B4GALT5多克隆抗体制备
3.3.5 猪B4GALT5亚细胞定位分析
3.4 实验结果
3.4.1 猪B4GALT5 基因的克隆与序列分析
3.4.2 GST-pB4GALT5 蛋白表达及抗体制备
3.4.3 猪B4GALT5 亚细胞定位分析
3.5 分析与讨论
3.5.1 猪B4GALT 家族成员的特征和潜在功能
3.5.2 猪B4GALT5 可催化半乳糖基转移反应
3.5.3 鼠抗猪B4GALT5 抗体的特异性评价
3.6 本章小结
第4章 猪B4GALT5 对PRRSV 增殖的影响
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 细胞、载体、菌株、病毒
4.2.2 主要试剂
4.3 实验方法
4.3.1 真核表达载体构建
4.3.2 细胞复苏与培养
4.3.3 转染及接毒
4.3.4Total RNA提取及反转录
4.3.5 相对荧光定量PCR
4.3.6Western blot
4.3.7 病毒滴度（TCID50）鉴定
4.3.8 siRNA 干扰
4.3.9 免疫共沉淀（Co-IP）
3.10 免疫荧光
4.4 实验结果
4.4.1 过表达B4GALT5 抑制PRRSV 增殖
4.4.2 干扰B4GALT5表达可促进PRRSV增殖
4.4.3 B4GALT5 与 GP5 存在互作
4.5 分析与讨论
4.5.1 猪B4GALT5 调节PRRSV 的增殖
4.5.2 猪B4GALT5 参与GP5 的糖基化修饰
4.6 本章小结
第5章 猪B4GALT5 对免疫分子的影响
5.1 引言
5.2 实验材料
5.2.1 细胞与病毒
5.2.2 主要试剂
5.3 实验方法
5.3.1 细胞复苏与培养
5.3.2 转染及接毒
5.3.3Total RNA提取及反转录
5.3.4 相对荧光定量PCR
5.3.5Western blot
5.3.6 siRNA干扰
5.3.7 流式细胞术
5.4 实验结果
5.4.1 过表达B4GALT5 促进免疫分子表达
5.4.2 干扰B4GALT5 表达可抑制免疫分子表达
5.5 分析与讨论
5.5.1 猪B4GALT5可加强炎症反应
5.5.2 猪B4GALT5 可提高细胞抗原提呈能力
5.6 本章小结
结论与展望
本文创新之处
参考文献
附录
发表论文和参加科研情况说明
致谢
天津大学;
