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【6h】

解角蛋白微生物的选育及角蛋白酶酶学性质的研究

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目录

摘要

Abstract

前言

一、角蛋白概述

二、微生物降解角蛋白

1.降解角蛋白微生物的类群及角蛋白酶的酶学性质

2.角蛋白酶的分子生物学研究

3.角蛋白降解的生化机制

三、降解角蛋白微生物的应用前景

1.羽毛处理及动物饲料的开发

2.羊毛仿羊绒

3.其它方面

四、选题意义

研究路线

材料与方法

一、材料

1.菌种:

2.培养基(W/V%):

3.试剂:

4.电泳系统:

5.仪器:

二、方法

1.角蛋白底物的制备:

2.降解角蛋白微生物的选育及鉴定:

3.L4菌株发酵条件的优化及发酵动态曲线的测定:

4.角蛋白酶的分离纯化:

5.角蛋白酶理化性质的检测

6.角蛋白酶酶学性质的检测:

7.角蛋白酶的应用:

结果与分析

一、产角蛋白酶的微生物的选育:

1.筛选

2.L4菌株的菌种鉴定:

二、L4菌株发酵条件的优化及动态曲线的测定:

1.工作曲线的绘制:

2.L4菌株发酵条件的优化:

3.L4菌株生长曲线及其它动态曲线的测定:

三、角蛋白酶的分离纯化:

1.硫铵溶液饱和度的选择:

2.硫铵溶液中保护剂(金属离子)的添加:

3.角蛋白酶保存条件的考察----6种缓冲液对角蛋白酶活力的影响:

4.角蛋白酶的分离纯化:

四、角蛋白酶理化性质的研究:

1.角蛋白酶纯度检测及分子量测定:

2.角蛋白酶的等电点测定:

3.角蛋白酶成分测定:

五、角蛋白酶酶学性质的研究

1.肽酶及角蛋白酶反应的最适温度和温度的耐受性:

2.肽酶及角蛋白酶反应的最适pH和pH的耐受性:

3.肽酶及角蛋白酶的Km值和Vmax:

4.蛋白酶抑制剂对酶活力的影响:

六、角蛋白酶的应用

讨论

一、角蛋白酶酶活力的测定方法

二、角蛋白酶的分离纯化:

三、角蛋白酶的酶学性质:

四、角蛋白降解菌L4及其产生的角蛋白酶的应用前景:

小 结

参考文献

致 谢

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摘要

该研究从腐烂的羊毛中筛选出一株具有降解角蛋白能力的L<,4>菌株,经检测初步印象为芽孢杆菌.通过正交实验对L<,4>菌株的培养条件进行了优化,结果在含3﹪可溶性淀粉,2﹪鸡毛粉,0.5﹪Na<,2>HPO<,4>,0.0375﹪KH<,2>PO<,4>,0.01﹪MgCl<,2>,0.01﹪CaCl<,2>,0.4NaCl,初始pH为7.5的培养基中,于28℃,120转/分的转速下,培养48小时,产生的胞外角蛋白酶活力最高,其肽酶活力可达4.5U/ml,角蛋白酶活力为269.1U/ml.L<,4>菌株所产生的胞外角蛋白酶经过硫铵盐析,Sephadex G-75凝胶过滤,DEAE-cellulose 52离子交换,Sepharose 4B凝胶过滤等色谱层析得到纯化,经SDS-PAGE检测呈现单一条带.角蛋白酶分子量为149KD,由四个分子约为37.5KD的亚基组成,用等电聚焦电泳测得其等电点为7.76,以纸层析法初步确认该酶为高甘露糖型糖蛋白.该角蛋白酶在以酪蛋白为底物时,最适作用温度为50℃,最适pH为7.0,其Km值为3.13mmol/L,Vmax为6.44×10<'-3>mmol/L·s<'-1>.在以自制的角蛋白溶液为底物时,该酶最适作用温度为40℃,最适pH为7.0,其Km值为1.88mmol/L,Vmax为2.72×10<'-2>mmol/L·s<'-1>.该酶受邻啡罗啉和EDTA的抑制,可视为一种含Zn<'2+>的金属蛋白酶.L<,4>菌株产生的角蛋白酶可以酶解羽毛粉,剥离羊毛表面的角质化鳞片,在羊毛经微生物酶法制取仿羊绒的工艺中,具有潜在的应用价值.

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