胶质瘤中胰岛素样生长因子结合蛋白2（IGFBP-2）基因的作用研究

摘要

目的：研究胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP-2)在人胶质瘤组织及大鼠胶质瘤模型中的表达和siRNA转染对胶质瘤细胞系U251细胞增殖的抑制作用。方法：1.采用免疫组化技术对53例不同级别的人胶质瘤组织微阵列标本及鼠胶质瘤细胞进行研究，探讨IGFBP-2基因表达情况。2.人工化学法合成IGFBP-2基因的小干扰片断(siRNA)，采用脂质体介导的方法转染胶质瘤细胞系U251，计算细胞生长抑制率，测定MTT吸收值以观察转染细胞的增殖活性的变化，AnnevinV-FITC法检测转染细胞的凋亡状态。 结果：1.在53例不同分级的人胶质瘤和10例正常脑组织微阵列标本中，Ⅳ级胶质母细胞瘤IGFBP-2表达明显阳性，Ⅲ级胶质瘤标本大部分表达阳性，Ⅰ-Ⅱ级部分标本呈弱阳性或阴性，正常脑组织表达皆呈阴性。 2.大鼠胶质瘤标本中，肿瘤中心区域表达阳性，但是弱于周边区域的表达，而其他脑组织表达则呈阴性。 3.siRNA可通过脂质体介导作用成功转染入胶质瘤细胞内。siRNA转染胶质瘤细胞系U251后，可引起：①U251增殖活性有所下降，实验组生长抑制率在第36小时为14.09％。②实验组细胞代谢受抑制，MTT吸收值在转染后48小时和72小时下降，与正常对照组相比有统计学意义。③免疫组化结果显示实验组细胞IGFBP-2蛋白合成减少。④凋亡实验显示实验组在24小时早期凋亡增多，48小时晚期凋亡增多。 结论：高恶性的胶质瘤中IGFBP-2表达呈强阳性，而在低恶性的胶质瘤则部分呈阳性。人工化学方法合成的siRNA能够抑制细胞内IGFBP-2基因的表达，并在一定程度上抑制转染细胞的生长。

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第一章前言

第二章实验材料与方法

2.1实验材料

2.1.1细胞株，胶质瘤标本

2.1.2主要试剂

2.1.3主要设备仪器

2.2实验方法

2.2.1胶质瘤细胞系的培养

2.2.2免疫组织化学(S-P法)

2.2.3胶质瘤细胞系免疫组化

2.2.4 RNA干扰的体外研究(选用人胶质瘤细胞系U251)

2.4.5细胞生长实验

2.2.6 MTT比色法测定细胞生长活性

2.2.7 Annexin V-FITC法检测细胞凋亡

2.2.8组织免疫组化结果的判定方法

2.2.9实验数据的统计方法

第三章实验结果

3.1胶质瘤细胞系IGFBP-2的表达

3.2大鼠脑及脑胶质瘤组织IGFBP-2的表达

3.3人脑胶质瘤IGFBP-2的表达

3.4脂质体及siRNA最佳转染效率的测定

3.5 siRNA转染后细胞的生长状态

3.5 siRNA转染后IGFBP-2的表达

3.6 siRNA转染后细胞生长的测定

3.7 siRNA转染后细胞增值活性的测定

3.8 siRNA转染后对细胞凋亡的影响

第四章实验讨论

4.1 IGFBP-2与大鼠C6细胞及其动物模型的关系

4.2 IGFBP-2在人脑胶质瘤中的表达

4.3 RNA干扰技术

4.4 IGFBP-2的siRNA在胶质瘤细胞系U251中的应用

4.5目前有关胶质瘤的基因治疗

第五章结论

致谢

参考文献

综述 胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)的研究进展

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