血管紧张素Ⅱ对足细胞BK通道及TRPC6通道电流的影响

摘要

血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)是肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system，RAS)的关键活性物质，在血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme)的作用下由血管紧张素Ⅰ(angiotensinⅠ，AngⅠ)转化生成。AngⅡ与其受体(AngⅡ receptor，ATR)结合发挥生物学作用，包括收缩血管、升高血压、促进肾上腺释放醛固酮，促进神经末梢释放儿茶酚胺等，此外还有促进细胞生长，调节激素、细胞因子及基因表达等作用。目前的研究已证实，AngⅡ的异常与脑血管疾病、内分泌疾病、心血管疾病、肝脏疾病等相关。例如：糖尿病肾病、肥胖、心肌肥厚、房颤、肝纤维化、急性呼吸窘迫综合症、青光眼等。然而从电生理学角度上研究AngⅡ对肾脏影响的实验并不多，本实验正着眼于此开展研究。
　　 足细胞是一种增殖能力有限的终末分化细胞，其位于肾小球毛细血管壁的最外层，参与构成阻止蛋白漏出的分子屏障和电荷屏障，维持肾小球滤过膜(glomerular filtration barrier，GFB)的功能，成为阻止蛋白丢失的一道重要屏障。越来越多的研究证明足细胞在肾脏疾病的发展中有重要地位。
　　 由Slo1基因编码的大电导钙激活钾通道(BK)与瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)在许多细胞系上共表达，其中就包括足细胞。因此，本研究就利用膜片钳技术检测血管紧张素Ⅱ对足细胞上BK通道及TRPC6通道电流的影响，讨论其可能机制。
　　 实验选用分化成熟的小鼠足细胞系，使用全细胞膜片钳技术记录了对照组和实验组(10-6mol/L浓度的AngⅡ)足细胞上BK通道及TRPC6通道的电流。主要实验结果如下：
　　 1、血管紧张素Ⅱ对足细胞上BK通道有抑制作用：实验结果显示AngⅡ抑制BK通道电流的幅值，Ⅰ-Ⅴ曲线斜率减小，激活曲线左移。
　　 2、血管紧张素Ⅱ对足细胞上TRPC6通道有激活作用：实验结果显示AngⅡ增加TRPC6通道电流的幅值，Ⅰ-Ⅴ曲线斜率增大。
　　 根据上述结果，我们得出了以下结论：AngⅡ可影响足细胞BK、TRPC6通道电流，这可能是其导致肾脏损伤的机制之一。AngⅡ对BK通道的影响可能与TRPC6通道有关。

目录

文摘

英文文摘

本文主要缩略语表

第一章 引言

第一节 血管紧张素Ⅱ生理和病理生理作用研究概况

1.1.1 血管紧张素Ⅱ的生理作用

1.1.2 血管紧张素Ⅱ与相关疾病及病理过程的机制研究

第二节 离子通道概述

第三节 足细胞结构与生理、病理生理作用

1.3.1 足细胞概述

1.3.2 足细胞病

第四节 膜片钳实验操作和基本记录模式

1.4.1 膜片钳基本原理和实验操作

1.4.2 膜片钳基本记录模式

1.4.3 膜片钳技术与其他实验方法的结合

第五节 本论文研究目的、意义和内容

1.5.1 本实验研究目的

1.5.2 本实验研究意义

1.5.3 本实验研究内容

第二章 实验材料和方法

第一节 实验材料

2.1.1 实验细胞

2.1.2 主要实验试剂

2.1.3 主要溶液配置

2.1.4 实验用品及仪器

2.1.5 实验用计算机软件

第二节 实验方法

2.2.1 足细胞培养

2.2.2 玻璃微电极的制备

2.2.3 全细胞膜片钳的记录

2.2.4 实验注意事项

第三节 数据的采集、分析和统计

第三章 实验结果

第一节 血管紧张素Ⅱ对BK通道电流的影响

3.1.1 血管紧张素Ⅱ对ⅠBK的影响

3.1.2 血管紧张素Ⅱ对ⅠBK电压-电流(I-V)曲线的影响

3.1.3 血管紧张素Ⅱ对ⅠBK激活动力学的影响

第二节 血管紧张素Ⅱ对TRPC6通道电流的影响

3.2.1 血管紧张素Ⅱ对ⅠTRPC6的影响

3.3.2 血管紧张素Ⅱ对ⅠTRPC6电压-电流(I-V)曲线的影响

第四章 讨论

第一节 血管紧张素Ⅱ对BK通道电流的影响的机制分析

4.1.1 大电导-钙离子激活的K+通道的特性

4.1.2 Ang Ⅱ对ⅠBK影响的机制分析

第二节 血管紧张素Ⅱ对TRPC6通道电流的影响的机制分析

4.2.1 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6的特性

4.2.2 Ang Ⅱ对ⅠTRPC6影响的机制分析

第五章 结论

参考文献

致谢

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