用分子印迹技术从杏鲍菇中分离纯化麦角硫因

摘要

麦角硫因(Ergothioneine，EGT)是一种低分子量抗氧化物，在人体及哺乳动物的血液及组织中含量丰富。麦角硫因具有thiol和thione两种形式，降低了氧化与还原状态之间的电势差，因此具有更强的抗氧化作用，同时也有抗肿瘤、抗炎症等方面的报道。
　　 杏鲍菇（Pleurotus eryngii）集食用、药用、食疗于一体，具有“平菇王”之称。具有降血压、降血脂以及美容的作用，而且对某些肿瘤也有一定的预防和抑制作用，具有提高人体免疫力、抗动脉粥样硬化、抗氧化的功能。虽然报道了杏鲍菇中含有丰富的麦角硫因，但至今并没有对杏鲍菇中麦角硫因分离纯化。本实验用分子印迹技术从杏鲍菇中分离纯化麦角硫因。
　　 首先利用本体聚合法，合成了分子印迹聚合物。然后利用分子印迹固相萃取技术对杏鲍菇粗提液进行萃取。结果显示以本实验方法合成的分子印迹聚合物对麦角硫因具有特异性识别并具有效的富集作用，对麦角硫因的特异性识别高达54.8％，富集作用明显，与粗品相比，可达到3.07倍。与以C18为填料的SPE柱相比，进一步说明了对麦角硫因的识别特异性。而且通过电子扫描显微镜对印迹和非印迹两种合成的聚合物实现宏观的观察，与非印迹聚合物相比，印迹聚合物具有较规则的颗粒大小以及比较均匀的空穴。
　　 麦角硫因在抑制红细胞溶血方面表现出显著的效果，在500μg/mL时抑制率可达到67.3％，为正对照Vc的75.5％。但是在抑制小鼠脑脂质过氧化方面效果不明显。另外通过测试菌株E.coli BL21-pPR的生长状况，麦角硫因100μg/mL时对HIV蛋白酶活性抑制效果最好，抑制率为23.0％，为正对照Pepstatin A活性的65.7％。在转化了pLTR质粒的E.coli DH5α菌株中提取质粒，质粒线性状态的含量指示了麦角硫因对HIV整合酶的抑制作用，在样品浓度为1mg/mL时，抑制率为59.2％，为正对照的的76.0％。
　　 本实验为杏鲍菇在药用、食疗方面的发展提供了参考。

目录

声明

摘要

第一章 前言

第一节 自由基概述

1．1．1 氧自由基的产生与来源

1．1．2 自由基与疾病

第二节 菇类中的天然抗氧化物质

1．2．1 维生素

1．2．2 多酚类

1．2．3 多糖

1．2．4 蛋白类

第三节 麦角硫因(ergothioneine， EGT)概述

1．3．1 麦角硫因的发现

1．3．2 麦角硫因功能

第四节 杏鲍菇

第五节 分子印迹技术(Molecular imprinted technology，MIT)

1．5．1 分子印迹技术的基本原理

1．5．2 分子印迹聚合的影响因子

1．5．3 分子印迹聚合物的制备方法

1．5．4 分子印迹技术与固相萃取(Solid-Phase Extraction，SPE)

1．5．5 分子印迹技术遇到的挑战

第六节 课题研究的内容与意义

第二章 实验材料与方法

第一节 实验材料

2．1．1 杏鲍菇(Pleurotus eryngii)

2．1．2 实验动物

2．1．3 主要试剂

2．1．4 主要仪器

第二节 实验方法

2．2．1 杏鲍菇中麦角硫因的粗提取

2．2．2 分子印迹固相萃取(MISPE)

2．2．3 与C18吸附效果比较

2．2．4 扫描电镜观察

2．2．5 麦角硫因生物活性

第三章 结果与分析

第一节 鲍菇中麦角硫因的粗提取

第二节 分子印迹聚合物的制备

3．2．1 聚合方法的选择

3．2．2 致孔剂的选择

3．2．3 功能单体优化

3．2．4 交联剂优化

3．2．5 上样溶液的优化

3．2．6 淋洗溶液的优化

3．2．7 洗脱溶液的优化

第三节 分子印迹固相萃取

第四节 与C18 SPE柱的比较

第五节 扫描电镜观察

第六节 麦角硫因的活性

3．6．1 DPPH清除活性

3．6．2 抑制红细胞溶血活性

3．6．3 抑制小鼠脑脂质过氧化活性的测定

3．6．4 抑制HIV蛋白酶活性

3．6．5 抑制HIV整合酶活性

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

致谢

个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果