肠道病毒71型3B蛋白类似物和3C蛋白酶底物的设计与合成

摘要

手足口病是婴幼儿常见的传染病，临床上以发热、咽炎和手、足、口腔等部位出现皮疹、溃疡等表现为主，个别患者可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等致命性并发症。手足口病是全球性传染病，世界大部分地区均有此病流行的报导，已经引起了全世界的普遍关注。肠道病毒71型是引起手足口病的重要病原体之一，属于小核糖核酸病毒科。目前已经有疫苗处于临床研究阶段，但仍没有有效的药物能够很好的治疗肠道病毒71型引起的疾病。
　　3B蛋白(VPg)在肠道病毒71型RNA的复制合成中发挥着至关重要的作用。3B蛋白是肠道病毒71型进行RNA复制的病毒编码蛋白，其作为一种引物，开启了RNA的复制过程。肠道病毒71型的3B蛋白由22个氨基酸残基构成:GAYSGAPKQVLKKPALRTATVQ。3B蛋白中的酪氨酸通过与RNA基因中的UMP末端形成磷酸二酯键，能够与新合成的病毒RNA的5'末端形成共价结合。然而到目前为止，3B蛋白具体的作用机制还仍然尚不明确。
　　本课题通过用苯丙氨酸替代酪氨酸，合成出四肽片段:GAFS，七肽片段:GAFAGAP,十肽片段:KPALRTATVQ。结果发现四肽和七肽具有较差的活性，而十肽片段显示良好的活性。用固相合成方法尝试合成一系列的十肽序列。目前生物活性测试仍在进行，还没有得到具体的生物活性测试结果。
　　3C蛋白酶是特异性蛋白酶，负责特异性地切割蛋白，在病毒复制过程中发挥着极其重要的作用。利用能量共振转移的方法，在多肽片段中加入荧光基团NMA和荧光淬灭基团DNP，针对3C蛋白酶的特异性切割位点的氨基酸序列，用固相合成多肽方法合成3C蛋白酶的切割底物。针对这些底物进行了生物活性评价，其中底物片段NMA-IEALFQGPPKFRK(DNP)表现出了较好的生物测试活性。

目录

声明

摘要

符号说明

第一章 前言

第一节 手足口病概述

第二节 肠道病毒概述

第三节 肠道病毒71型概述

1．3．1 肠道病毒71型的基因组

1．3．2 肠道病毒71型的生命周期

1．3．3 肠道病毒71型生命周期中的蛋白

第四节 固相合成多肽方法概述

1．4．1 液相合成多肽法

1．4．2 固相合成多肽法

第二章 肠道病毒71型病毒3B蛋白类似物和3C蛋白酶切割位点的研究

第一节 肠道病毒71型3B蛋白的作用机制

第二节 肠道病毒71型3C蛋白酶的作用机制

第三章 肠道病毒71型3B蛋白类似物和3C蛋白酶底物的合成

第一节 肠道病毒71型3B蛋白类似物的合成

3．1．1 合成路线

3．1．2 实验部分

第二节 肠道病毒71型3C蛋白酶底物的合成

第四章 实验结果与讨论

第一节 多肽的分离纯化研究

4．1．1 肠道病毒71型3B蛋白类似物的分离纯化

4．1．2 肠道病毒71型3C蛋白酶底物的分离纯化

第二节 肠道病毒71型3B蛋白类似物的活性评价

第三节 肠道病毒71型3C蛋白酶底物的活性评价

参考文献

致谢

附录

个人简历