奶牛乳房炎对乳酶活性、急性期蛋白含量的影响及其作为隐性乳房炎诊断指标的研究

摘要

乳房炎是奶牛业生产中危害最大的疾病之一，随着我国奶牛业和乳品工业的发展及人类对公共卫生的重视，奶牛乳房炎的危害已受到人们的广泛关注。奶牛乳房炎特别是隐性乳房炎的早期诊断对防治具有重要意义。目前，乳房炎的常规诊断方法均存在一定的缺陷，迫切需要寻找敏感性高的替代诊断方法。为了寻找敏感的隐性乳房炎诊断指标，同时也为奶牛乳房炎的药物治疗效果评价及预后提供科学依据，进行了以下研究： 1．奶牛乳房炎对乳酶活性的影响及其作为隐性乳房炎诊断指标的研究 以乳汁体细胞数（SCC）作为划分奶牛隐性乳房炎的标准，将220份乳样分成5个组（Ⅰ～Ⅴ），其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组为健康乳样（SCC<50×104mL-1），Ⅳ、Ⅴ组为隐性乳房炎乳样（SCC>50x104mL-1）。测定各组乳样中髓过氧化物酶（MPO）、乳酸脱氢酶（LDH）、N-乙酰基-1-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）、乳过氧化物酶（LP）和碱性磷酸酶（ALP）活性，分别分析它们与乳汁体细胞数的相关性，及评价LDH作为奶牛隐性乳房炎诊断指标的敏感性（SEN）、特异性（SPE）、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）和Jouden指数。结果显示：（1）5种乳酶活性与SCC（1gSCC）均呈正相关：LDH（r=0．978，P<0．01）、MPO（r=0．965，P<0．01）、NAG（r=0．947，P<0．05）、ALP（r=0．953，P<0．05）、LP（r=0．914，P<0．05）。（2）Ⅴ组LDH活性是Ⅰ组的5．23倍，组间LDH活性变化幅度大于其他4种乳酶，可见LDH活性在不同体细胞组间变化敏感。（3）选择LDH活性>100U/L作为诊断隐性乳房炎的阈值：Jouden指数0．52，敏感性70．0％，特异性82．3％，阳性预测值59．0％，阴性预测值88．7％，表明LDH可作为奶牛隐性乳房炎的诊断指标。 2．奶牛乳房炎对急性期蛋白含量的影响及其作为隐性乳房炎诊断指标的研究 奶牛乳样分组方法同研究1。测定5个组乳样中结合珠蛋白（HP）、血清淀粉样蛋白A（SAA）和C-反应蛋白（CRP）含量，分别分析它们与乳汁体细胞数的相关性，及评价HP作为奶牛隐性乳房炎诊断指标的敏感性（SEN）、特异性（SPE）、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）和Jouden指数。结果显示：（1）3种急性期蛋白含量与SCC（1gSCC）均呈正相关：SAA（r=0．952，P<0．05）、HP（r=0．901，P<0．05）、CRP（r=0．881，P<0．05）。（2）隐性乳房炎奶牛乳中HP含量显著高于健康奶牛（P<0．05），Ⅰ组未检测出HP，Ⅴ组HP含量是Ⅱ组的16．82倍。不同体细胞组间HP含量变化差异显著（P<0．05），组间HP含量变化幅度较SAA和CRP大，可见HP含量在不同体细胞组间变化敏感。（3）选择HP含量>110ng/mL作为诊断隐性乳房炎的阈值：Jouden指数0．70，敏感性72．4％，特异性95．2％，阳性预测值94．7％，阴性预测值76．9％，表明HP可作为奶牛隐性乳房炎的早期诊断指标。 3．母兔乳头管灌注脂多糖（LPS）建立奶牛乳房炎动物模型研究 分娩6d后的22只新西兰健康泌乳母兔，随机分成T1、T2组，分别按0，15mg/KW和0．075mg/KW剂量，向母兔乳导管内灌注大肠杆菌LPS。灌注LPS之前2h的泌乳母兔作为对照组，灌注之后的为试验组。于灌注LPS前2h，灌注后6h、12h、24h、48h、72h、5d和7d，采集母兔耳缘静脉血和乳腺组织。测定不同时间点血清中NAG、LDH、LP、ALP、MPO和SOD活性、MDA含量、T-AOC及急性期蛋白SAA、HP、CRP、ALB的含量，制作乳腺组织病理切片并观察乳腺组织的动态病理变化。结果显示：（1）母兔乳腺内灌注不同剂量LPS后均出现急性乳房炎的临床症状，乳腺组织也出现相应病理变化，表明成功建立了奶牛乳房炎病理模型；（2）血清中酶活性、急性期蛋白含量与乳腺炎症程度相关，MPO、NAG、LDH、LP、ALP活性和HP、SAA、CRP含量随乳腺炎症程度的加重而升高，随炎症程度的减轻而降低，而ALB含量变化呈相反趋势；不同时间点和不同剂量组间，LDH活性和HP含量的变化敏感。（3）LDH和HP是乳腺炎症程度的敏感指标。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

声明

第一章 文献综述

1 奶牛乳房炎概述

1.1 定义

1.2 流行情况

1.3 病因

1.4 发病机制

1.5 危害

2 奶牛乳房炎牛旁诊断法

2.1 临床检查

2.2 加州乳房炎试验

2.3 苛性钠试验

2.4 乳汁pH值检测

3 奶牛乳房炎常用实验室诊断法

3.1 乳汁体细胞计数

3.2 乳汁微生物培养

3.3 乳汁电导率检测

3.4 其他诊断法

4 乳酶在奶牛乳房炎诊断中的应用

4.1 乳酸脱氢酶(LDH)

4.2 N-乙酰基-1-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)

4.3 乳酸过氧化物酶(LP)

4.4 碱性磷酸酶(ALP)

4.5 髓过氧化物酶(MPO)

5 急性期蛋白在奶牛乳房炎诊断中的应用

6 奶牛乳房炎动物模型研究现状

第二章 奶牛乳房炎对乳酶活性的影响及其作为隐性乳房炎诊断指标的研究

1 试验材料

1.1 奶牛

1.2 主要试剂

1.3 主要仪器

2 试验方法

2.1 乳样采集

2.2 测定项目及方法

2.3 数据统计分析

3 结果与分析

3.1 奶牛乳房炎对乳酶LDH、MPO活性的影响

3.2 奶牛乳房炎对乳酶NAG、LP、MPO活性的影响

3.3 5 种乳酶活性与SCC(lgSCC)的相关性比较

3.4 乳酶LDH作为奶牛隐性乳房炎诊断指标的分析

4 讨论

4.1 检测乳酶活性诊断奶牛乳房炎的可能性

4.2 隐性乳房炎对乳酶活性的影响

4.3 乳酶LDH可作为奶牛隐性乳房炎的诊断指标

5 小结

第三章 奶牛乳房炎对急性期蛋白含量的影响及其作为隐性乳房炎诊断指标的研究

1 试验材料

1.1 奶牛

1.2 主要试剂

1.3 主要仪器

2 试验方法

2.1 乳样采集

2.2 测定项目及方法

2.3 数据统计分析

3 结果与分析

3.1 奶牛乳房炎对HP、SAA、CRP含量的影响

3.2 牛乳中SAA、HP、CRP与SCC(lgSCC)的相关性分析

3.3 乳汁急性期蛋白HP作为奶牛隐性乳房炎诊断指标的分析

4 讨论

4.1 急性期蛋白诊断奶牛乳房炎的可能性

4.2 奶牛乳房炎对SAA、H9、CRP含量的影响

4.3 急性期蛋白HP可作为奶牛隐性乳房炎的诊断指标

5 小结

第四章 家兔乳头管灌注脂多糖(LPS)建立乳房炎模型研究

1 试验材料

1.1 试验动物

1.2 主要试剂

1.3 主要仪器

2 试验方法

2.1 LPS灌注液的配制及灌注方法

2.2 血样和乳腺组织的采集

2.3 测定指标及方法

2.4 统计学分析

3 结果与分析

3.1 母兔乳腺组织病理学变化

3.2 临床和生理指标时相的变化

3.3 血清中SOD活性、MDA含量、T-AOC变化

3.4 血清NAG、LDH、LP、ALP和MPO活性

3.5 血清中SAA、HP、CRP和ALB含量

4 讨论

4.1 乳头管灌注LPS前后乳腺组织的动态病理变化

4.2 奶牛乳房炎病理模型的建立

4.3 乳头管灌注LPS前后血清酶活性的动态变化

4.4 乳头管灌注LPS前后血清急性期蛋白含量的动态变化

4.5 血清LDH活性和HP含量与乳腺组织病理动态变化相关性

5 小结

结论

参考文献

致谢

攻读硕士期间发表论文情况

附图