百合切花采后微生物对衰老的影响及其保鲜技术的研究

摘要

本研究以生态学、生物防治原理为基础，在分析百合切花萎蔫的主要病原、筛选生物保鲜原型菌株基础上，优化了生物防腐菌的发酵条件，弄清了百合最适保鲜浓度及对百合生理代谢的影响，为进一步开发用于切花环保型保鲜剂奠定了基础。主要研究结果如下：
　　 1、弄清了引起百合切花萎蔫的主要病原。从瓶插寿命接近终点切花茎切口分离得到了8种真菌，8种菌株进行人工回接试验。回接结果显示，有三种真菌作用导致百合切花萎蔫，通过形态鉴定与分子鉴定，得到这三种真菌是黄色镰刀菌、土黄冻土毛霉、长柄链格孢。其中又以黄色镰刀菌的影响为最大。
　　 2、筛选出了能使百合切花延长花期的微生物菌株。从健康百合的花瓣、花茎、叶三部分分离得到14株真菌、27株细菌。将这41株菌株同引起百合切花萎蔫的三种病原菌作拮抗实验。通过显著性分析得到了JX6号菌株为对三种病原菌抑制作用最强菌株。通过形态鉴定与分子鉴定，得到JX6号菌株为地衣芽孢杆菌。
　　 3、优化了地衣芽孢杆菌的培养条件。以葡萄糖作为C源且含量为2％、NH4NO3为氮源且量为0.2％时产生的活性物质的活性最高。初始pH值以6为最佳。用500ml三角瓶进行培养，最佳培养液体积为75mL，培养过程中，当温度处于20℃～30℃之间，其抗生物质的活性均较好，尤以25℃最高。这种条件下地衣芽孢杆菌产抗生物质的活性最高，对病原菌的抑制效果最好，能提高百合切花的保鲜效果。
　　 4、筛选出了最适保鲜浓度。取地衣芽孢杆菌甲醇粗提液7个浓度水平与去菌体发酵液7个浓度水平进行单因素实验，结果显示：在同一条件下，使用低浓度初提液与发酵液都能有效延长百合切花的瓶插寿命，增加花朵直径，改善切花体内水分状况，提高观赏品质，其中以0.25％浓度为最佳。高浓度代谢液与发酵液对切花有负面作用。
　　 5、研究了微生物保鲜液对百合生理代谢的影响。0.25％浓度初提液与发酵液处理可保持切花水分平衡，保持切花花青素含量，延缓切花蛋白质的降解速率。使切花保持较高的SOD活性。能有效防止切花质膜的过氧化。

目录

文摘

英文文摘

1. 前言

2. 研究目的和意义

3. 文献综述

3.1 香水百合的生物学特征

3.2 香水百合切花的衰老机理

3.2.1 呼吸强度与切花衰老的关系

3.2.2 水分代谢与切花衰老的关系

3.2.3 内源激素与切花衰老的关系

3.2.4 活性氧与切花衰老的关系

3.2.5 微生物对切花衰老的影响

3.3 香水百合切花衰老过程中的生理生化变化

3.4 香水百合切花保鲜技术研究进展

3.4.1 物理保鲜研究

3.4.2 化学保鲜研究

3.4.3 生物保鲜研究

4 技术路线

5 材料与方法

5.1 供试花材

5.2 茎切口微生物与切花衰老关系的研究

5.2.1 瓶插液微生物繁殖曲线的制作

5.2.2 切花茎切口微生物的分离培养

5.2.3 分离微生物的回接实验

5.3 香水百合内生真菌、细菌、放线菌的分离、纯化

5.3.1 内生真菌的分离、纯化

5.3.2 内生细菌的分离、纯化

5.4 拮抗菌的筛选

5.4.1 拮抗真菌菌的筛选—对峙培养法

5.4.2 拮抗细菌与拮抗放线菌的筛选

5.5 微生物鉴定

5.5.1 真菌的鉴定

5.5.2 细菌的鉴定

5.6 拮抗菌的条件优化

5.6.1 C、N源对拮抗细菌产拮抗产物的影响

5.6.2 拮抗细菌产拮抗物质的培养条件优化

5.7 制备保鲜制剂

5.7.1 摇床发酵培养

5.7.2 次生代谢产物的提取

5.8 保鲜液浓度筛选

5.9 最佳配方对香水百合切花的保鲜机制研究

5.9.1 含水量的测定

5.9.2 可溶性蛋白的测定采用考马斯亮蓝法

5.9.3 丙二醛的测定

5.9.4 超氧物歧化酶(SOD)活性测定

5.9.5 花青素含量的测定

6. 结果与分析

6.1 香水百合切花衰老中微生物的繁殖

6.2 香水百合切花衰老病原菌的分离与鉴定

6.2.1 镰孢属

6.2.2 毛霉属

6.2.3 链格孢属

6.3 拮抗菌的分离筛选鉴定

6.3.1 拮抗菌的初筛

6.3.2 拮抗菌的复筛

6.3.3 拮抗菌的鉴定

6.4 拮抗菌培养条件的优化

6.4.1 C源、N源的优化

6.4.2 产拮抗物质的培养条件的优化

6.5 保鲜浓度的筛选

6.5.1 不同浓度保鲜液对瓶插寿命的影响

6.5.2 不同浓度保鲜液对切花水分平衡值的影响

6.5.3 不同浓度保鲜液对花枝鲜重的影响

6.6 保鲜液对切花生理指标的影响

6.6.1 保鲜液对百合切花含水量的影响

6.6.2 保鲜液对百合切花花青素含量的影响

6.6.3 保鲜液对百合切花蛋白质含量的影响

6.6.4 保鲜液对百合切花SOD活性的影响

6.6.5 保鲜液对百合切花花瓣MDA含量的影响

7、结论与讨论

7.1 影响百合切花衰老的病原菌

7.2 百合切花内生有益菌的筛选

7.3 地衣芽孢杆菌培养条件的优化及其代谢产物的纯化

7.4 保鲜剂最佳保鲜效果浓度筛选

7.5 保鲜液对百合切花保鲜机制的影响

7.6 展望

参考文献:

附:

致谢