银耳多糖的提取纯化、理化性质及抗氧化活性研究

摘要

本研究以福建古田所产银耳干样为实验材料，采用超声波-热水浸提、乙醇沉淀、Sevage+HCl法脱蛋白、超纯水透析、DEAE-52纤维素离子交换层析以及SephadexG200凝胶过滤层析，分离纯化得到三种均一的银耳多糖TF-PA、TF-PB、TF-PC，分别对其进行理化性质及抗氧化活性测定。主要研究结果如下:
　　(1)通过响应面分析法优化，确定了水提法提取银耳多糖的最佳提取条件:提取时间为3.8h、提取温度为92℃、料液比为1∶43。
　　(2)通过单因素试验，得出Sevage法脱蛋白的最佳操作参数并筛选得到最佳处理方法:在振荡时间1.5h、试剂添加比例为溶液的1/2、氯仿与正丁醇比例为4∶1、处理次数为1次的条件下进行sevage处理，再辅以24h的HCl处理，其蛋白脱除率提高为79.82％，多糖损失率则为29.42％。
　　(3)通过分离纯化得到的三种多糖中，TF-PA为淡黄色晶体，TF-PB与TF-PC均为疏松的白色絮状物;三者均无味，易吸湿，易溶于水，不溶于有机溶剂，其高浓度水溶液呈粘稠状。
　　(4)通过红外光谱分析，发现三种多糖的图谱中出现多处多糖的特征吸收峰，同时，结合显色反应证实TF-PC中含有葡萄糖醛酸。通过HPLC与GC-MS分析，TF-PA为5.34×105Da的中性杂多糖，主要由阿拉伯糖、甘露糖、木糖、葡萄糖和半乳糖组成，其摩尔比为1.39∶8.40∶3.81∶24.65∶1;TF-PB为7.08×105Da的酸性杂多糖;主要由阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、果糖和半乳糖组成，其摩尔比为1.24∶1∶2.28∶6.78∶1.58∶1.66; TF-PC为1.47×106Da的酸性杂多糖，主要由阿拉伯糖和葡萄糖组成，其摩尔比为1.05∶1。
　　(5)通过体外的自由基清除实验表明，三种多糖均具有一定的抗氧化活性，但其对几种自由基的清除效果均低于同等浓度的Vc溶液，其中又以TF-PA的清除效果最弱。1mg/mL的TF-PA、TF-PB、TF-PC水溶液，还原力大小依次为0.3227、0.5312、0.5127，对羟基自由基的清除率依次为41.13％、74.82％、75.21％，对DPPH自由基的清除率依次为20.30％、32.19％、35.24％，对超氧阴离子的清除率依次为30.06％、40.28％、43.27％。

目录

声明

摘要

1 文献综述

1．1 概述

1．2 银耳多糖及其构效关系研究

1．2．1 银耳多糖的生物活性研究进展

1．2．2 多糖的构效关系研究进展

1．3 银耳多糖的提取及分离纯化工艺应用

1．3．1 银耳多糖的提取工艺

1．3．2 银耳多糖的分离纯化工艺

1．4 本研究目的意义

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验仪器及试剂

2．2．1 主要仪器

2．2．2 主要药品试剂

2．3 实验方法

2．3．1 银耳多糖的提取

2．3．2 银耳多糖的分离纯化

2．3．3 各项指标的测定方法

3 结果分析

3．1 水提法提取银耳多糖的响应面优化结果分析

3．1．1 水提法的单因素试验结果

3．1．2 水提法的响应面优化结果

3．2 银耳多糖的分离纯化效果分析

3．2．1 几种脱蛋白方法的比较

3．2．2 DEAE-52纤维素离子交换层析

3．2．3 Sephadex G-200凝胶过滤层析

3．2．4 纯度鉴定

3．3 银耳多糖的理化性质检测结果

3．3．1 银耳多糖的物理性质

3．3．2 银耳多糖的多糖纯度

3．3．3 银耳多糖的相对分子质量

3．3．4 银耳多糖的单糖组成

3．3．5 银耳多糖的红外光谱扫描结果

3．3．6 银耳多糖的抗氧化活性

4 讨论与结论

4．1 讨论

4．1．1 水提法提取银耳多糖的工艺研究

4．1．2 银耳多糖脱蛋白工艺的比较研究

4．1．3 三种银耳多糖的理化性质及抗氧化活性比较

4．2 结论

参考文献

致谢