α-菠菜甾醇对小鼠小肠P糖蛋白和寡肽转运体PepT1药物转运体的影响研究

摘要

目的:本实验在中药引经的理论指导下，结合本实验室前期对桔梗引经作用的研究方法，首先从桔梗各有效成分中筛选出化学结构清晰的α-菠菜甾醇(α-spinasterol)作为研究物质，然后选用酒石酸泰乐菌素(Tylosin tartrate)为底药，利用免疫组化，荧光定量PCR(Realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR)和免疫蛋白印迹(Western blotting，WB)等研究方法，通过研究α-菠菜甾醇对小鼠小肠段外排型药物转运体P糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)和摄取型药物转运体寡肽转运体1（oligopeptide transporter，PepT1）表达的影响，初步探讨在吸收环节上使桔梗发挥“载药上行”作用的机理，为进一步研究引经作用机制等实验提供基础，同时为验证引经理论的科学性。
　　方法:144只健康昆明小鼠，随机分为4个组，每组36只，雌雄各半。Ⅰ组:单剂量一次灌服α-菠菜甾醇[12.5mg/(kg·b·w)];Ⅱ组:单剂量一次同时灌服α-菠菜甾醇[12.5mg/(kg·b·w)]与酒石酸泰乐菌素[600mg/(kg·b·w)];Ⅲ组:单剂量一次灌服酒石酸泰乐菌素[600mg/(kg·b·w)];Ⅳ组:单剂量一次灌服生理盐水。每组按0.2mL·10g-1BW的剂量共灌胃5天，分别在1，3，5天后处死一批采样。采用免疫组化，荧光定量PCR和免疫蛋白印迹的方法测定1，3，5天的小鼠肠道上P-gp和PepT1的表达的变化。
　　结果:从三个方法的结果来看:Ⅰ组（α-菠菜甾醇组）和Ⅱ组（混合组）相对于Ⅳ组（对照组）外排型药物转运体P-gp表达减少或强度减弱;而摄取型药物转运体PepT1表达增多或强度增强;而Ⅲ组（酒石酸泰乐菌素组）的外排型药物转运体P-gP表达增多或强度增强;摄取型药物转运体PepT1表达减少或强度减弱，且都随着用药时间的延长差异性越来越显著(P＜0.01)。其中免疫组化结果表明，P-gp在十二指肠的变化差异较空肠和回肠更加明显，而PepT1在空肠的变化比十二指肠和回肠更为显著;荧光定量PCR和免疫印迹结果显示，P-gp在各肠段的表达是从近端到远端逐渐递增，而PepT1在各肠段的表达在十二指肠最多，在空肠和回肠依次递减。
　　结论:①α-菠菜甾醇具有抑制药物转运体P-gp表达和促进药物转运体PepT1表达的作用。②酒石酸泰乐菌素具有促进P-gp表达和抑制PepT1表达的作用。③桔梗“引经”在吸收环节上的作用机理之一是作用于肠道上的药物转运体。④酒石酸泰乐菌素和α-菠菜甾醇产生的药物间相互作用(Drug-drug interaction, DDI)的机制之一是通过作用于P-gp和PepT1两个靶点。

目录

论文说明

声明

摘要

缩略语表

第一部分 选题背景及文献综述

1 选题背景及研究目的与意义

1．1 选题背景

1．2 研究目的与意义

2 文献综述

2．1 药物转运体

2．2 “引经”概况

2．3 桔梗概述

2．4 植物甾醇及α-菠菜甾醇简介

2．5 泰乐菌素

第二部分 实验研究

第一章 免疫组化测定P-gp和PepT1在小肠肠道的表达

1．材料与方法

2 实验结果

3．分析与讨论

第二章 荧光定量PCR测定目标蛋白的mRNA

1．材料与方法

2．结果

3．分析与讨论

第三章 免疫印迹法测量目标蛋白的表达

1．材料与方法

2．结果

3．分析与讨论

第三部分 结论和创新

1 结论

2 创新

参考文献

致谢

攻读硕士期间发表的论文