油菜（Brassica napus L）矮秆突变相关基因的RAPD标记与其序列特异扩增片段的分析

摘要

该文采用该矮秆突变的纯合品系DDF-1及高秆亲本3529为材料,用50个10-mer随机引物对高矮植株亲本进行RAPD扩增,选出了7个在高、矮亲本植株间产生特异多态性扩增的引物,作为突变相关基因位点的特异分子标记.在F<,2>代的矮秆纯合体植株中利用这7个特异分子标记的随机引物扩增并进行连锁检验,从中筛选到4个与矮秆基因突变位点有紧密连锁的特异分子标记,根据这些标记的长度将它们分别命名为S5<,910>、S12<,610>、S29<,390>、S47<,720>,并计算了这4个特异分子标记与此突变位点的连锁图距,分别为S5<,910>:16.6cM,S12<,610>:0.0cM,S29<,390>:16.6cM、S47<,720>:5.0cM.为了对矮秆突变相关基因进行定位,从4个RAPD分子标记中选出2个F<,2>代中重组率最低的标记S12<,610>和S47<,720>,这两个RAPD分子标记与矮秆突变位点连锁最为紧密,其中S12<,610>可能就位于这个与植株高度相关的基因中.再将这两个标记对回交世代的总DNA和一些其他品种的高秆油菜的总DNA进行扩增,确认了这两个RAPD标记的真实性.将这两个RAPD标记进行测序,得到其序列,其大小分别为S12<,610>:662bp和S47<,720>:680bp.研究了该序列特异扩增片段的特征并根据这个序列建立了2组SCAR标记.根据SCAR标记扩增的结果,没有能产生差异的条带,我们推测这种矮秆植株突变是点突变,并且点突变的位置在原RAPD引物的序列上.再根据以SCAR引物和RAPD引物对高秆和矮秆油菜总DNA扩增的结果分析,我们推测RAPD引物的序列中发生突变的位点只在整个RAPD标记的下游一侧,其上游则是相同的序列.

目录

引言

1材料与方法

1.1材料及试剂

1.2实验方法

2结果与分析

2.1高秆亲本3529与矮秆突变品系DDF-1之间多态性的RAPD分析

2.2与矮秆突变相关位点紧密连锁的特异RAPD标记的筛选

2.3与矮秆突变位点紧密连锁的RAPD标记的片段的克隆及分析

2.4 SCAR标记的构建和分析

3讨论

小结

参考文献

文献综述RAPD标记技术与应用

1分子标记技术概述

2 RAPD技术介绍

3 RAPD技术的应用

4 RAPD技术衍生技术AFLP技术的应用

5 RAPD技术的前景展望

6总结

参考文献

在读硕士期间发表论文情况

致谢

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