人类β—防御素—2基因转染293细胞产物抗菌活性的研究

摘要

研究背景： 内源性抗菌肽(endogenous peptides)是天然免疫的重要介质，是炎症反应起保护作用的重要分子基础，它是一种小分子阳离子多肽类物质，具有广谱抗微生物活性。人类防御素根据半胱氨酸残基位置及二硫键连接方式的不同，可分为α和β防御素两类<'[5]>。人β-防御素(humanbeta-defensin，HBD)是一类由34-42个氨基酸残基组成的阳离子小肽，分子量较小(3.5-4.5 kDa)，分子内含6个保守的半胱氨酸残基形成3个特征性的链内二硫键，具有广谱抗菌活性，是呼吸道、消化道、泌尿生殖道等粘膜防御系统中的重要介质。目前已发现四种β-防御素，其中hBD-2是1997年在人的银屑病损皮肤中发现，它由41个氨基酸组成，富含阳离子氨基酸和半胱氨酸<'[9]>。通常情况下正常上皮细胞hBD-2不表达或者表达水平很低，但当感染时，HBD-2的表达可以被TNF-a、IL-1β、LPS及细菌等多种原炎剂(Proinflammatory agents)所诱导。HBD-2是呼吸道粘膜抗感染的重要分子基础。肺囊性纤维性病变(Cysitc fibrosis)的病人很容易发生肺部感染，其发病机制与气道上皮细胞离子通道调节蛋白(CFTR)基因缺陷，导致HBD-2的杀菌作用受到抑制有关。在后抗生素时代的今天，耐药性微生物给人类健康带来了新的威胁。人防御素独特的作用机理，可能避免致病微生物对其产生耐药性，因此具有良好的药用前景。目前随着基因工程的进展，已有学者利用原核、真核微生物、植物、COS．7细胞等研究防御素的表达。 研究目的： 本实验研究目的评估HBD-2基因转染293细胞的培养产物蛋白质的抗菌活性。为进一步研究HBD-2基因转染支气管上皮细胞提供依据。 研究方法： 本实验利用分子生物学技术构建HBD-2真核表达重组质粒pcDNA3.1-zeo-HBD-2，经脂质体介导转染293细胞，收集培养上清，观察它对多种细菌的抗菌活性。 研究结果： 本实验通过RT-PCR检测到转染细胞中HBD-2基因表达；并且重组质粒转染293细胞的培养上清的抗菌活性强于对照组。 研究结论： HBD-2基因转染293细胞后培养上清有一定的抗菌活性。

目录

声明

前言

第一部分真核表达载体pcDNA3.1-zeo-HBD-2的构建

材料与方法

结果

第二部分重组质粒pcDNA3.1-Zeo(+)-HBD-2在哺乳动物293细胞中的转染表达

材料与方法

结果

第三部分HBD-2转染细胞培养上清的抗菌活性

材料与方法

结果

结论

讨论

参考文献

综述 防御素抗菌活性研究进展

致谢