雷公藤多苷致大鼠卵泡发育障碍模型的中医证候属性研究

摘要

目的：验证雷公藤多苷致大鼠卵泡发育障碍模型的中医证候属性，为中医药调节女性生殖轴的研究提供一个新的符合中医证候特点的病证结合动物模型。
　　方法：将雌性育龄期SD大鼠行阴道脱落细胞学连续涂片，筛选出动情周期正常者为受试动物。随机留取8只为正常对照组，其余大鼠予雷公藤多苷50mg/(kg·d)灌胃。同时监测大鼠动情周期的变化，当全部大鼠均出现动情周期紊乱时，确定造模成功。将已造模大鼠随机分为5组，每组8只，分别为模型对照组、新加归肾丸组、圣愈汤组、加减逍遥散组、丹溪治湿痰方组。正常对照组与模型对照组每日生理盐水灌胃；各中药组分别以相应中药复方灌胃，每日1次，连续10天。各组均于末次灌胃24h后股动脉取血并处死动物，取出卵巢和子宫，称重法计算卵巢与子宫指数；放射免疫法检测血清E2、P和IGF-1水平；酶联免疫吸附法检测血清FSH、LH水平；免疫组化法检测卵巢FSHR、ERβ、IGF-1R、VEGF及Flk-1表达；将卵巢、子宫组织病理切片HE染色在光镜下观察分析卵巢、子宫组织细胞形态学改变以及计数卵巢中各级卵泡和黄体数。
　　结果：
　　(1)雷公藤多苷50mg/(kg·d)灌胃2周造模后，大鼠表现为一般情况差，动情周期紊乱。卵巢与子宫指数降低；卵巢中卵泡数及黄体数减少；卵巢门血管腔变小、血管壁增厚；血清IGF-1水平升高、E2与P水平明显降低；卵巢ERβ、VEGF及Flk-1表达减少、FSHR、IGF-1R表达增强。模型对照组以上指标与正常对照组相比差异均有统计学意义(p<0.05)。模型对照组血清中FSH与LH水平有升高趋势，但与正常对照组相比差异均无统计学意义(p>0.05)。
　　(2)各中药复方组的FSH和LH水平与正常对照组、模型对照组比较，差异均无统计学意义(p>0.05)。新加归肾丸组的卵巢与子宫指数、卵巢中卵泡数及黄体数、卵巢门血管腔与血管壁厚度、血清E2、P与IGF-1水平及卵巢ERβ、VEGF、Flk-1、FSHR、IGF-1R表达与模型对照组比较，差异均有统计学意义(p<0.05)。各中药复方组中，以上各项指标以及子宫与卵巢组织形态学只有新加归肾丸组最接近于正常对照组。
　　(3)相关性分析：卵巢指数与血清E2水平、卵巢VEGF及Flk-1的表达之间均呈正相关关系；血清E2水平与血清IGF-1水平、卵巢IGF-1R的表达呈负相关关系；血清E2水平与卵巢ERβ及成熟卵泡数之间呈正相关关系。结果表明：ERβ、IGF-1、IGF-1R、VEGF及Flk-1的变化可反映卵泡发育及卵巢功能情况。
　　结论：
　　(1)雷公藤多苷50mg/(kg·d)连续灌胃2周可造成育龄期大鼠急性卵巢功能损伤和卵泡发育障碍状态。
　　(2)补肾气益精血的新加归肾丸通过提高雌激素及其受体水平，能明显促进卵泡发育，提高生长卵泡数量；通过增加卵巢局部血供，能明显改善雷公藤多苷造成的子宫及卵巢组织形态损伤。
　　(3)本研究通过多方比较“以药测证”在一定程度上验证了雷公藤多苷致大鼠卵泡发育障碍模型符合中医肾精气亏虚证候属性。

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引 言

正 文

1实验材料

1.1实验动物

1.2实验试剂和药品

1.3实验设备与仪器

2实验方法

2.1动物造模与分组

2.2 给药方法

2.3检测方法

2.4数据处理

3实验结果

3.1阴道脱落细胞涂片结果

3.2 各组大鼠一般情况与体重比较

3.3各组大鼠的卵巢与子宫指数及卵巢直径的比较

3.4各组大鼠血清FSH,LH,E2,P和IGF-1含量比较

3.5各组大鼠卵巢组织FSHR、ERβ及IGF-1R积分光密度比较

3.6各组大鼠卵巢组织VEGF及Flk-1积分光密度比较

3.7各组大鼠子宫组织形态学的变化

3.8 各组大鼠卵巢组织的变化

3.9相关性分析

4 讨论

4.1 现代医学对卵泡发育障碍的认知与研究

4.2卵泡发育的调控机制

4.3祖国医学“肾主生殖”理论

4.4卵泡发育障碍与肾虚关系探讨

4.5肾虚与生殖内分泌激素的关系

4.6雷公藤多苷致大鼠卵泡发育障碍模型的建立

4.7实验用中药复方的选择

4.8 新加归肾丸对雷公藤多苷致大鼠卵泡发育障碍模型的影响

4.9本实验肾虚证的阳性指标

4.10 关于“以药测证”法

结 论

1 IGF-1、IGF-1R、ERβ、VEGF及Flk-1可反映卵泡发育及卵巢功能

2雷公藤多苷可造成大鼠卵泡发育障碍的病理状态

3新加归肾丸可改善雷公藤多苷致大鼠卵泡发育障碍状态

4雷公藤多苷致大鼠卵泡发育障碍模型辨证属肾精气亏虚证

问题与展望

1大鼠动情周期的判断问题

2动物模型的问题

3观察指标的选择问题

4中药复方的选择问题

5中药复方干预用药的时间问题

展望

致谢

参考文献

附 件

综 述

参考文献

声明