黄连多糖的提取方法、单糖组成及其抑制α-葡萄糖苷酶活性研究

摘要

黄连为毛茛科植物黄连Coptis. chinensis Franch.、三角叶黄连C. deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao和云连C. teeta Wall.的干燥根茎[1]，药材依次习称为“味连”、“雅连”、“云连”，具有清热燥湿、泻火解毒的功效[2]。目前，关于黄连主要集中在生物碱化学与药理学等方面较多，对于黄连多糖的生物活性和组成分析的研究却鲜有报道。
　　目的：:
　　开展黄连多糖的提取方法研究，建立黄连多糖单糖组分控制方法，并对黄连多糖与黄连生物碱体外抑制α-葡萄糖苷酶的活性进行比较，为黄连资源的综合利用及质量控制提供科学依据。
　　方法：
　　1.采用Box-Behnken设计-效应面法，研究黄连多糖回流提取过程中四个主要因素：提取温度、提取次数、提取时间和料液比，以及它们之间的交互作用，及其对三个响应值（多糖出膏率、多糖得率和糖醛酸得率）的影响。
　　2采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）柱前衍生化HPLC法，建立分析三个黄连品种（味连Coptis chinensis、雅连C. deltoidea和云连C. teeta）多糖的单糖组分分析方法。
　　3.采用体外抑制α-葡萄糖苷酶活性方法，研究黄连多糖及生物碱组分体外抑制α-葡萄糖苷酶活性。
　　结果：
　　1.通过单因素实验确定影响黄连多糖提取方法主要因素的适宜水平，分别为：提取温度80-100℃，提取时间2-4 h，提取次数1-3次，料液比1:10-1:20。进一步采用Box-Benhnken设计方案分别进行29次选择性组合实验，以出膏率、多糖得率、糖醛酸得率为响应面作响应值，得到相应的数学模型，最终得到提取温度为100℃，提取时间为3.8 h，提取次数为3次，料液比1:15.7为黄连多糖的最佳提取方法条件。
　　2.建立了不同品种黄连药材中半乳糖醛酸等7种单糖成分的HPLC组成分析方法，其重复性、选择性良好，7种单糖的平均回收率为97.09-99.14％，三种黄连多糖的组成成分一致，味连多糖中甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖的摩尔比为0.20：1：0.08：6.35：3.63：1.89：3.20；雅连多糖为0.39：1：0.14：6.35：4.83：2.38：2.77；云连多糖为0.38：1：0.09：5.83：5.70：2.44：4.40。
　　3.黄连多糖与其生物碱均具有较好抑制α-葡萄糖苷酶的活性，黄连多糖部位的IC50值为296.89μg·mL-1，黄连生物碱部位的IC50值为171.67μg·mL-1，而黄连其他部位则表现为很弱。发现二者不同的配比对α-葡萄糖苷酶抑制作用有很大的差别，黄连多糖与黄连生物碱3:1，其IC50值最低，揭示其抑制α-葡萄糖苷酶活性最强。
　　结论：
　　1.提取温度为100℃，提取时间为3.8 h，提取次数为3次，料液比为1:15.7，构成黄连多糖的最佳提取方法条件。
　　2.黄连多糖经水解成单糖，通过PMP衍生后，在250 nm下具有很强的紫外吸收，该方法具有较好的重复性、稳定性。
　　3.黄连多糖与黄连生物碱部位均具有较好抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用，二者配伍后抑制α-葡萄糖苷酶的活性优于单一部位。

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中文摘要

英文摘要

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英文缩写词对照表

引言

一、多糖的研究概述

二、黄连多糖的研究概述

三、本论文的研究思路

第一章 Box-Behnken设计-效应面法优化黄连多糖的提取方法研究

1仪器与试药

2实验方法

3小结与讨论

第二章 柱前衍生化-HPLC法测定黄连多糖的单糖组分

1仪器与试药

2实验方法

3小结与讨论

第三章 黄连多糖及生物碱组分体外抑制α-葡萄糖苷酶活性研究

1仪器与试药

2实验方法

3小结与讨论

第四章 总结与讨论

1总结

2讨论

3创新性

4不足与展望

参考文献

综述: 体现中医药特色的道地药材黄连品质评价系统研究

致谢

在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果

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