多糖类α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选及降血糖活性研究

摘要

糖尿病已成为当今严重危害人类生命的重大疾病之一。α-葡萄糖苷酶抑制剂在临床治疗糖尿病应用率高达20％以上。近几年，天然产物中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂正日益受到关注，糖作为天然产物中重要部分，具有丰富的生物功能，从天然产物中寻找多糖类α-葡萄糖苷酶抑制剂具有重要意义。
　　本文中以新鲜黄芪、平菇、雪莲果及河蚌肉为原料，采用水提醇沉法提取得到粗多糖，分别命名为APS-Ⅰ、MPS-Ⅰ、YPS-Ⅰ和SMPS-Ⅰ，经苯酚-硫酸法测定，APS-Ⅰ、MPS-Ⅰ、YPS-Ⅰ和SMPS-Ⅰ的糖含量分别为53.4％、31.3％、56.3％和42.14％。四种粗多糖以Sevage法除蛋白后，得到APS-Ⅱ，MPS-Ⅱ，YPS-Ⅱ和MPS-Ⅱ其糖含量分别为67.1％、36.5％、74.1％和81.5％;黄芪、平菇、雪莲果及河蚌肉多糖分别纯化得到APS-Ⅲ、MPS-Ⅲ、YPS-Ⅲ和SMPS-Ⅲ，其糖含量分别为99％、41.1％、79.8％和96.47％。
　　通过酶促反应筛选酵母源、小鼠源α-葡萄糖苷酶的最适底物及底物浓度、最适酶活力单位，得到体外筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂的酶促反应体系为:α--葡萄糖苷酶10μL，酵母源、小鼠源酶活力单位均为0.2U·mL-1，麦芽糖溶液5μL，酵母源选取麦芽糖浓度30mmol·L-1，小鼠源选用麦芽糖浓度40mmol·L-1，样品或阳性对照5μL，采用葡萄糖氧化酶法测定酶反应产物。
　　阿卡波糖作为阳性对照，对四种天然产物中提取的多糖进行体外筛选。相对多糖浓度为0.4mg·mL-1时，黄芪、平菇、雪莲果及河蚌肉多糖对酵母源α-葡萄糖苷酶抑制率分别为40.1％、66.2％、21.9％和17％，对小鼠源的抑制率分别为38.7％、45.1％、26.9％和19.1％，黄芪、平菇多糖的抑制率较强。通过不同相对糖含量筛选实验得出，黄芪多糖对酵母源及小鼠源α-葡萄糖苷酶均有浓度依赖效应。不同纯度多糖对比实验表明纯化后APS-Ⅲ、MPS-Ⅲ及YPS-Ⅲ对α-葡萄糖苷酶抑制率均高于未纯化多糖。采用小鼠高血糖模型降糖实验方法考察四种多糖的降血糖活性。结果显示:黄芪多糖对小鼠空腹血糖值有极显著降低(p＜0.01)的作用，且具有浓度剂量依赖性，平菇低、中剂量，雪莲果低、中剂量组空腹血糖值显著降低(p＜0.05)，四种多糖体内降血糖效果与体外实验基本一致。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 多糖的研究进展

1．1．1 多糖的提取方法

1．1．2 多糖的纯化

1．1．3 多糖的生物活性

1．2 α-葡萄糖苷酶抑制剂与糖尿病的研究进展

1．2．1 糖尿病的概况

1．2．2 α-葡萄糖苷酶抑制剂的概况

1．3 本课题研究的目的、意义和主要内容

2 材料与方法

2．1 仪器、试剂与材料

2．1．1 仪器

2．1．2 试剂与材料

2．2 方法

2．2．1 多糖的提取制备

2．2．2 α-葡萄糖苷酶反应最适条件的确定

2．2．3 多糖对α-葡萄糖苷酶的影响

2．2．4 多糖类α-葡萄糖苷酶抑制剂降血糖活性研究

3 结果与讨论

3．1 多糖的提取分离与纯化

3．1．1 标准曲线的绘制

3．1．2 粗多糖的提取分离与纯化

3．2 α-葡萄糖苷酶反应最适条件的确定

3．2．1 最适底物及底物浓度的确定

3．2．2 最适酶活力单位的确定

3．3 多糖对α-葡萄糖苷酶的影响

3．3．1 不同多糖对α-葡萄糖苷酶的影响

3．3．2 多糖浓度对α-葡萄糖苷酶的影响

3．3．3 多糖纯度对α-葡萄糖苷酶的影响

3．4 多糖类α-葡萄糖苷酶抑制剂降血糖活性研究

3．4．1 小鼠一般情况的观察

3．4．2 多糖对糖尿病小鼠体重变化量的影响

3．4．3 多糖对糖尿病小鼠采食及饮水量的影响

3．4．4 多糖对糖尿病小鼠空腹血糖的影响

3．4．5 多糖对糖尿病小鼠糖耐量的影响

3．4．6 多糖对糖尿病小鼠血清TG和TC的影响

3．4．7 多糖对糖尿病小鼠脏器指数的影响

3．4．8 大脑、肝脏及肾脏组织病理学变化

4 结论

5 展望

参考文献

7 攻读硕士期间发表的论文

致谢