越婢汤治疗遗尿症逼尿肌不稳定的机理探讨

摘要

背景：遗尿症是儿童临床常见疾病之一。遗尿患儿长期得不到诊治，将会降低其生活质量，影响儿童心理和人格的健康发展，其心理问题甚至会遗留终身。由此，探寻遗尿症早期而有效的干预，是一项具有深远社会意义的工作，也是一个重大而艰巨的课题。近年来，现代医学对本病展开了多方位的研究，其具体发病机制虽不十分明确，但膀胱逼尿肌不稳定无疑已成为目前国内外研究本病的主要方向之一，逼尿肌不稳定是临床最常见的膀胱尿道功能障碍之一，而膀胱中ICCs样细胞数量的增多可能是引起逼尿肌不稳定产生的主要原因之一；一氧化氮(NO)作为抑制性非肾上腺能神经非胆碱能神经(NANC)神经递质，也参与了膀胱功能的调节。同时，作为目前为止研究得最清楚的神经营养因子，神经生长因子（NGF）水平的变化可直接影响病理性膀胱神经的分布。中医对本病的认识有两千多年的历史，积累了丰富的临床治疗经验。因此从中医药研究本病有可能成为在本病治疗方法上的有益补充。我们在前期的临床观察中发现越婢汤治疗小儿遗尿症疗效肯定，故本研究以越婢汤为干预方剂，探讨越婢汤对遗尿症不稳定膀胱模型的作用机制。
　　目的：探讨越婢汤对遗尿症不稳定膀胱模型的作用机制，从而对中医“提壶揭盖”“下病上取”，以及“肺为水之上源”等理论作出现代实验科学的严谨论证。
　　方法：将108只wistar大鼠随机分为膀胱出口梗阻手术组和假手术组，6周后行尿动力检查筛选出手术组膀胱逼尿肌不稳定大鼠和假手术组膀胱逼尿肌稳定大鼠进行研究。将手术组膀胱逼尿肌不稳定大鼠随机分为越婢汤古方组、越婢汤高剂量组、越婢汤中剂量组、越婢汤低剂量组、缩泉丸对照组、模型对照组，加上假手术组共7组，每组10-13只大鼠。给药14天后观察越婢汤各剂量组对模型的影响。从膀胱湿重、膀胱脓肿和结石情况宏观观察药物对模型的疗效，用免疫组化和western blot方法测试膀胱ICCS细胞含量；用酶联免疫法（ELISA）、免疫组化测试血清和膀胱NOS蛋白含量；用ELISA、免疫组化测试血清、下丘脑和膀胱NGF蛋白含量；并做出数据处理分析，从多角度探讨越婢汤对不稳定膀胱的可能作用机制。
　　结果：⑴造模结果：手术6周后，经尿动力学检测仪进行充盈性膀胱测压检测，假手术组大鼠膀胱逼尿肌不稳定（DI）发生率为16.7％（2/12）；手术组96只，尿路感染、漏尿死亡15只，其中63只出现DI，发生率为77.8%（63/81）。⑵宏观疗效：模型对照组大鼠膀胱发生膀胱脓肿1只，膀胱结石2只；越婢汤低剂量组大鼠发生膀胱脓肿1只，膀胱结石1只；其余各组未发现明显膀胱脓肿和膀胱结石。与假手术组相比，模型对照组大鼠膀胱湿重明显增高，具有非常显著的统计学意义（P<0.01），与模型对照组相比，越婢汤组大鼠膀胱湿重明显减轻，具有统计学意义（P<0.05）。⑶药物对膀胱ICCs细胞的影响：与假手术组比较，模型组膀胱逼尿肌ICCs细胞显著增多（P<0.05）；与模型组比较，越婢汤干预后膀胱逼尿肌ICCs细胞有显著减少（P<0.05）或表现出一定的量效关系。⑷药物对NOS的影响：与假手术组相比，模型对照组大鼠膀胱NOS含量明显增多，具有非常显著的统计学意义（P<0.01）；与模型对照组相比，越婢汤干预后大鼠膀胱NOS含量明显减少，具有显著的统计学意义（P<0.01），提示：越婢汤可以明显下调大鼠膀胱NOS含量；与假手术组相比，模型对照组大鼠血清NOS含量明显增多，具有非常显著的统计学意义（P<0.01）；与模型对照组相比，越婢汤干预后大鼠血清NOS有下调趋势。⑸药物对神经生长因子（NGF）的影响：膀胱组织免疫组化检查：与假手术组相比，模型对照组大鼠膀胱中NGF蛋白含量明显降低，具有非常显著的差异（P<0.01）；与模型对照组相比，越婢汤干预后大鼠膀胱中NGF蛋白含量明显升高，具有显著的差异（P<0.05），说明越婢汤具有上调DI大鼠膀胱组织NGF的作用；下丘脑免疫组化检查：与假手术组相比，模型对照组大鼠下丘脑中NGF蛋白含量明显降低，具有非常显著的差异（P<0.01）；与模型对照组相比，越婢汤干预后大鼠下丘脑中NGF蛋白含量明显升高，具有非常显著的差异（P<0.05）；说明越婢汤具有上调DI大鼠下丘脑NGF的作用；血清 ELISA检测：与假手术组相比，模型对照组大鼠血清中NGF蛋白含量明显降低，具有非常显著差异（P<0.01）；与模型对照组相比，越婢汤干预后大鼠血清中NGF蛋白含量明显升高（P<0.05），说明越婢汤具有上调DI大鼠血清NGF的作用。
　　结论：①越婢汤可以显著改善逼尿肌不稳定引起的膀胱功能障碍。②逼尿肌不稳定膀胱中ICCs细胞数量升高；膀胱组织和血清NOS含量升高；血清、下丘脑和膀胱组织中NGF含量均降低。③越婢汤古方组和高剂量组可以明显下调膀胱 ICCs细胞数量，下调膀胱组织NOS含量，上调血清、下丘脑和膀胱组织中NGF含量，其对遗尿症的治疗机理可能与此有关。

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引言

1 研究背景

2 立题依据

3 研究内容

4 技术路线

第一部分 文献研究

1.祖国医学对遗尿症的认识

2 提壶揭盖法

3.遗尿症与膀胱功能障碍

4不稳定膀胱与ICCs、NOS和NGF

第二部分 实验研究

实验一BOO大鼠模型的建立及药物对其的影响

实验二ICCs在BOO大鼠的表达及药物对其的影响

实验三NOS在BOO大鼠的表达及药物对其的影响

实验四NGF在BOO大鼠的表达及药物对其的影响

第三部分 讨论及结论

1 讨论

2创新点

3 结论

致谢

参考文献

问题与展望

附件一 实验图片

1膀胱ICCS细胞显微图像

2 膀胱一氧化氮合成酶显微图像

3 膀胱神经生长因子显微图像

4 下丘脑神经生长因子显微图像

5 实验照片

附件二 不稳定膀胱研究现状及进展

附件3 在读期间公开发表的学术论文

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