基于细胞响应谱技术的双黄连冻干粉针质量一致性研究

摘要

中药注射剂疗效确切，临床应用广泛，是中药现代化的重要标志。但是频频发生的不良反应尤其是过敏与类过敏反应，已为中药注射剂乃至整个中药行业的发展蒙上了一层阴影。在深入剖析中药注射剂现行质量标准及引发其不良反应原因的基础上，本文提出从生物活性角度出发，以双黄连冻干粉针为模式药，建立密切关联其不良反应的生物评价方法，对双黄连冻干粉针的质量一致性进行研究，以期为中药注射剂的临床安全有效使用提供新的技术支持。
　　本文从质量一致性角度入手，选取不良反应报道较多的代表性药物双黄连冻干粉针为模式药，收集不同批次样品，并根据样品在现实中可能导致质量变化的因素自制了系列特殊样品，在注射剂通则检查和现行化学特征图谱表征检测其质量变化的基础上，重点引入基于微电子阻抗技术的 xCELLigence实时细胞分析系统，建立密切关联临床不良反应的细胞响应谱方法，对双黄连冻干粉针正常与特殊样品质量一致性进行研究。本文主要研究结果如下：
　　1建立了清双黄连冻干粉针的化学特征图谱用于评价其质量一致性
　　采用HPLC技术建立了含21个特征峰的双黄连冻干粉针样品化学特征图谱，并确认了其中10个主要成分，较为全面地反映了其所含的化学成分及主要的药效物质基础。结合相似度分析与聚类分析，考察了基于化学特征图谱分析的双黄连冻干粉针质量一致性检测方法，该方法能够区分高温、光照处理的特殊样品。
　　2首次建立了基于肥大细胞脱颗粒检测的细胞响应谱方法
　　针对目前双黄连冻干粉针及其他中药注射剂所引起不良反应以过敏和类过敏反应为主，选取肥大细胞RBL-2H3作为模式生物，使用xCELLigence实时细胞分析系统对阳性药C48/80诱导的RBL-2H3脱颗粒作用进行了实时监测，建立了基于肥大细胞脱颗粒检测的细胞响应谱方法。同时结合肥大细胞脱颗粒后所引发的一系列生物学效应特点，设计了以过敏介质释放检测和细胞形态学观察等为主要评价指标的常规经典脱颗粒实验，对基于实时在线检测法的肥大细胞脱颗粒效应检测方法进行验证。结果表明，所建细胞响应谱方法能够实时动态监测肥大细胞脱颗粒现象。
　　3应用细胞响应谱技术研究了双黄连冻干粉针质量一致性
　　应用所建立的细胞响应谱技术，对双黄连冻干粉针正常与特殊样品进行了检测，并对方法适用性与可靠性进行了考察。提取各项参数：脱附时间（ΔT）、曲线下面积（AUC）、抑制率（I1，I2）、相似度（Similarity）。结果表明，新建方法能够更好地区分双黄连冻干粉针正常样品与各类特殊样品。该技术可作为现行质量控制方法的有益补充，用于双黄连冻干粉针及其他中药注射剂的质量一致性检测与不良反应预警。
　　4初步建立了主要基于化学-生物特征图谱关联分析的双黄连冻干粉针质量一致性研究与不良反应预警方法
　　结合前文所建立的各方法，序贯应用注射剂常规检查、化学特征图谱检查、细胞响应谱检查和参数分析，从化学成分、生物活性-不良反应的角度全面评价双黄连冻干粉针的质量，从而为双黄连冻干粉针及其他中药注射剂的质量控制与临床安全有效使用提供保障。

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英文摘要

第一章 绪论

第一节 中药注射剂不良反应概况

第二节 中药注射剂的质量控制现状分析

第三节 本课题的整体研究思路

第二章 双黄连冻干粉针样品采集、制备与注射剂通则检查

第一节 双黄连冻干粉针信息调研与样品的采集、制备

第二节 双黄连冻干粉针的注射剂通则检查

第三节 小结与讨论

第三章 基于化学特征图谱分析的双黄连冻干粉针质量一致性检测

第一节 化学特征分析方法学考察

第二节 双黄连冻干粉针样品化学特征图谱分析

第三节 小结与讨论

第四章 基于肥大细胞脱颗粒检测的细胞响应谱方法建立

第一节 细胞响应谱方法概述

第二节 基于肥大细胞脱颗粒检测的细胞响应谱方法建立

第三节 小结与讨论

第五章 基于细胞响应谱技术的双黄连冻干粉针质量一致性研究

第一节 双黄连冻干粉针细胞响应谱方法学考察

第二节 双黄连冻干粉针样品细胞响应谱分析

第三节 小结与讨论

第六章 总结与展望

1 本文主要研究结果与结论

2 问题与建议

参考文献

致谢

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