基于主成分-聚类分析法的何首乌化学成份及毒性相关指标研究

摘要

目的：
　　用 HPLC建立何首乌指纹图谱，主成分分析及聚类分析法分析何首乌产地，主要成分变化，炮制时间，毒性指标等。用生首乌和制首乌给药大鼠28 d检验何首乌安全性，为何首乌用药疗程和用药剂量提供参考。
　　方法：
　　选用HPLC法研究21批不同市售制首乌中主要成分的含量、特征性成分以及变化特征。炮制48 h何首乌的水提物化学成分进行22批次不同时间点含量分析，对所得数据用SPSS21.0，中药指纹图谱计算机辅助相似度评价软件A版进行处理分析，采用PCA以及OPLS-DA找出何首乌炮制6 h差异成分。何首乌水提物( PERW)以及制何首乌水提物（PEPW）不同剂量连续28 d以给药剂量40、20、10 g/kg分别灌胃正常SD大鼠，每天1次，连续28 d观察大鼠的一般状况、体重变化、血生化指标以及肝组织病理检查，比较何首乌生品及其炮制品对大鼠肝毒性的差异。
　　结果：
　　21批市售制首乌经过主成分分析得到5个主成分，其累计方差贡献率达81.251%；聚类分析方法将21批制首乌样品按成分变化特征聚为4类，将各成分贡献率达80%的成分进行聚类分析，得到与总成分一致的聚类图。炮制何首乌48 h何首乌，炮制到4~5h何首乌成分的含量达到最高值，随着炮制时间延长，成分含量呈现下降趋势。聚类分析方法将6h生首乌和制首乌样品基本按成分变化特征聚为4类，偏最小二乘分析法得到二苯乙烯苷和白藜芦醇为不同炮制时间的成分含量变化的主要差异成分。PERW和PEPW高剂量对雌性大鼠体重变化有显著影响，中低剂量对SD大鼠一般状况和体重无明显影响；病理组织无明显差异；肝脏组织基本正常。聚类分析法按各生化指标的特征聚为3类，从15个生化指标中贡献率达75%的指标7个 AST、ALT、r-GT、GLO、TG、GLU、TBA再进行聚类分析，得到与15个生化指标一致的聚类图。
　　结论：
　　21批制首乌主要成分的含量变化存在差异；儿茶素、芦荟大黄素-8-o-β-D-葡萄糖苷、虎杖苷、二苯乙烯苷、白藜芦醇、大黄素8-o-β-D-苷、大黄素甲醚苷、芦荟大黄素为主要特征性成分，河北保定市和四川大巴山售制首乌品质较佳。炮制时间在4 h最佳。相同剂量的生首乌和制首乌给药28d后，肝组织结构未出现器质性病变，但与肝功能代谢相关的血生化指标有明显变化，AST、ALT、r-GT、GLO、TG、GLU、TBA可为生首乌和制首乌肝毒性的特征性生化指标参考。

目录

缩略语表

前言

1.研究背景

2研究目的与意义

3课题研究思路与内容

第一章 何首乌指纹图谱研究

1.仪器和试药

2 实验方法

3实验结果

4.小结

第二章炮制时间对何首乌中成分的含量变化的影响

第一节 48 h 内何首乌最佳炮制时间的确定

1 实验材料

2 实验方法

3实验结果

第二节 炮制6h 内何首乌中成分变化及其差异指标的寻找

1 实验材料

2 实验方法

3实验结果

4.小结

第三章 何首乌炮制前后的水提物连续灌胃给药大鼠28d 毒性研究

1.实验材料

2.实验方法

3.实验结果

4.小结

讨论

结论

创新点

存在的问题与展望

致谢

参考文献

附录

附录1：综述：何首乌研究

附录2：在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果

声明