不同转移潜能大肠癌细胞株差异表达蛋白的蛋白质组学研究

摘要

目的和意义：观察5-氟尿嘧啶（5-FU）对不同转移潜能大肠癌细胞株的抑制作用，应用双向凝胶电泳技术，建立不同转移潜能大肠癌细胞株以及5-FU处理后的双向凝胶电泳图谱。通过比较两种不同转移潜能大肠癌细胞株的蛋白质表达谱的变化，从蛋白质水平上对大肠癌的转移机制作初步探讨；通过比较5-FU处理前后大肠癌细胞株的蛋白质表达谱的变化，从蛋白质水平上对5-FU抑制大肠癌转移机制作初步的探讨。 研究方法：(1)应用MTT比色分析法观察5-FU对两种不同转移潜能的人大肠癌细胞株的生长抑制情况，确立5-FU处理两种大肠癌细胞的浓度。(2)分组分为Lovo细胞组(A组)、SW480细胞组（B组）、Lovo细胞5-FU处理组（C组）、SW480细胞5-FU处理组（D组）（3）利用双向凝胶电泳(Two-dimensional electrophoresis，2-DE)分离总蛋白质，凝胶银染及考马斯亮蓝染显色，建立双向凝胶电泳图谱，经Imgae Master软件进行图像分析，筛选部分分离较好的差异蛋白质点。(4)应用基质辅助激光解吸电离飞行时间/飞行时间谱(Matrix-assistde laser desorption/ionization time-of-flihgt time-of-flight mass spectrometry MALDI-TOF-TOF-MS)分析部分差异表达的蛋白质点，获取肽质量指纹图谱，Mascot软件搜索NCBInr数据库鉴定蛋白质。（5）应用Western blot验证蛋白质表达情况。 结果：(1)MTT法显示5-FU在0～12.5μg/ml范围对Lovo细胞具有明显生长抑制作用，而5-FU在0～25μg/ml范围对SW480细胞有明显生长抑制作用，计算5-FU对两种大肠癌细胞株的IC50浓度分别为4.13μg/ml、12.86μg/ml（2）筛选出具有明显表达差异的蛋白质点共94个，选取其中24个蛋白质点进行质谱鉴定，成功鉴定出了16个蛋白，包括埃兹蛋白（Ezrin）、NM23A蛋白（non-metastatic cells 1,protein(NM23A）expressed in）、HSPA8（heat shock 70kDa protein 8）、核内不均一核糖核蛋白K（heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K）、二硫键异构酶A（protein disulfide isomerase A）、角蛋白10（keratin 10）、PP4蛋白（protein PP4），Western blot验证Ezrin蛋白发现其在Lovo细胞组中表达量与其他三组差异明显（p＜0.0001）。 结论：本研究通过MTT比色法观察到5-FU对两种大肠癌细胞具有明显的生长抑制作用，双向凝胶电泳和质谱技术鉴定出了一些差异表达蛋白质，这些差异蛋白质功能涉及肿瘤细胞生长、运动、黏附、凋亡等过程。