骨桥蛋白在不同转移潜能肺癌细胞株中的差异表达及其与肺癌转移相关功能研究

摘要

目的：研究骨桥蛋白在不同转移潜能肺癌细胞株中的差异表达及其与肺癌转移相关功能。方法：应用Western Blot及实时定量PCR检测NL9980和L9981细胞OPN基因mRNA及蛋白表达情况；构建OPN表达质粒，阳离子脂质体为载体包裹pcDNA3.1(+)-OPN表达质粒瞬时转染人大细胞肺癌细胞株NL9980，实时定量PCR及WesternBlot检测NL9980细胞OPN过表达及外源性OPN处理A549细胞后cortactin,Arp2及MMP-9的mRNA和蛋白表达变化;应用Western Blot检测Src通路p-Src蛋白及Erkl/2通路相关蛋白p-Src,p-p38和p-p42/p44变化;应用Western Blot和实时定量PCR检测NL9980细胞nm23-H1稳定沉默和L9981细胞nm23-H1过表达对OPN表达的影响，并应用Boyden小室法检测nm23-H1稳定沉默对NL9980细胞侵袭力的影响。结果：高转移潜能大细胞肺癌细胞株L9981的OPN mRNA表达水平显著高于低转移潜能大细胞肺癌细胞株NL9980;成功构建OPN-pcDNA3.1(+)表达质粒，成功瞬时转染NL9980和A549细胞株，构建NL9980-OPN和A549-OPN肺癌细胞株;NL9980-OPN肺癌细胞株体外迁移能力显著高于NL9980-control肺癌细胞株，两组间比较有显著性差异;NL9980-nm23-H1-KD细胞株的体外侵袭能力显著高于NL9980-control细胞株;结论:高转移潜能肺癌细胞株L9981存在OPNmRNA和蛋白过度表达;OPN基因的过表达和外源性可溶性OPN均能显著上调肺癌细胞侵入性伪足相关蛋白cortactin,Arp2和MMP-9的表达水平;OPN过表达能激活低转移潜能大细胞肺癌细胞株NL9980中的Src,ERK1/2信号通路，并显著增加NL9980细胞株和A549细胞株体外迁移和侵袭能力;OPN过表达和外源性可溶性OPN均能显著诱导NL9980细胞株和A549细胞株侵入性伪足的形成;nm23-H1基因能明显下调人高转移潜能大细胞肺癌细胞株L9981中的OPN基因的mRNA和蛋白表达水平，nm23-H1基因沉默能明显上调人低转移潜能大细胞肺癌细胞株NL9980的OPN基因mRNA和蛋白表达水平;并赋予其高转移潜能;nm23-H1基因可能通过调控OPN及其相关下游基因和信号传导通路抑制和/或逆转人肺癌侵袭转移潜能。