人参皂苷Re对胰岛素敏感性及脂代谢作用研究

摘要

[目的]： 探讨人参皂苷Re对高脂饮食诱导肥胖(DIO)大鼠胰岛素敏感性和血脂代谢的影响及其作用机制。 [材料与方法]： Wistar雄性大鼠(220±10g)81只，随机分为正常对照组(NC)、高脂饮食对照组(HF)和高脂饮食Re治疗组(HF-Re)。适应性喂养一周后，分别予以普通饮食或高脂饮食喂养两周，然后予以Re20mg/kg或等体积溶媒腹腔注射，每日两次。两周后，随机从各组取12只大鼠进行左侧颈动脉及右侧颈静脉置管，术后一周行清醒状态下高胰岛素.正葡萄糖钳夹(HEC)实验。其余大鼠继续给予Re或溶媒处理，3周后空腹采血，用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血浆白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-αTNF-α)、脂联素(adiponcetin)水平，用全自动生化仪测血糖、血脂浓度。同时留取肝脏、皮下(Sub)及附睾内脏脂肪组织(Epi)，并记录体重及Sub、Epi重量。石蜡包埋和苏木素伊红(HE)染色后，观察各组大鼠Epi脂肪细胞形态。用Real-timePCR和Westernblot方法研究Epi和肝脏组织炎症因子及相关信号通路基因和蛋白水平的变化。利用HepG2细胞模型，通过Westernblot和Real-timePCR技术，研究Re对脂代谢相关信号蛋白的影响。 [结果]： (1)成功建立了稳定的清醒状态下大小鼠HEC技术；(2)DIO大鼠的体重显著高于NC喂养组，Re可抑制DIO大鼠体重增加； (3)在高胰岛素.正葡萄糖钳夹过程中，HF和HF-Re组大鼠的葡萄糖输注速率(GIR)显著低于NC组，HF-Re组的GIR显著高于HF组； (4)DIO大鼠的Sub、Zpi重量及其占相应动物体重的比例显著高于NC组，HF-Re组的Sub、Epi含量显著低于HF组； (5)NC大鼠的Epi脂肪细胞较小，胞内脂肪含量较少，HF组大鼠Epi的脂肪细胞明显变大，胞内脂肪含量增多，HF-Re组大鼠的Epi脂肪细胞较HF组变小，胞内脂肪含量减少； (6)NC、HF和HF-Re各组间血浆脂联素、IL-6、TNF-α水平无显著差异，但HF组Epi的IL-6、TNF-α和瘦素(leptin)mRNA表达水平升高，而HF-Re组的Epi的IL-6、TNF-α和瘦素mRNA表达水平显著低于HF组，与NC组无显著差异。HF组Epi脂联素mRNA水平显著低于NC组，HF-Re组的Epi脂联素mRNA水平虽高于HF组，但低于NC组； (7)HF组大鼠Epi的IκBα和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)磷酸化水平显著低于NC组，HF-Re组大鼠Epi中IκBα及磷酸化AMPK水平显著高于HF组； (8)HF组大鼠Epi的c-jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化水平显著高于NC组，而HF-Re组大鼠Epi的JNK磷酸化水平显著低于HF组； (9)HF组大鼠Epi中AS160水平显著低于NC组，但HF-Re组的AS160水平显著高于HF组大鼠； (10)HF组和HF-Re组大鼠血浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL)水平显著高于NC大鼠，而HF-Re组的血浆TG、TC和LDL水平显著低于HF组； (11)HF组大鼠肝脏磷酸化胞外信号调节激酶(ERK)显著低于NC组，而HF-Re组的肝脏ERK磷酸化水平高于HF组。Re也可升高HepG2细胞的ERK和AMPK磷酸化水平，并能显著升高HepG2细胞LDL受体(LDLR)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)mRNA水平。 [结论]： 1、建立了稳定的清醒状态下大、小鼠高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术平台。 2、DIO大鼠的胰岛素敏感性低于NC组大鼠，人参皂苷Re可显著改善DIO大鼠的胰岛素敏感性。Re可能通过以下机制改善DIO大鼠胰岛素敏感性：抑制DIO大鼠体重增加，减少其皮下及内脏脂肪聚集，使其内脏脂肪细胞变小、胞内脂肪含量减少；激活DIO大鼠内脏脂肪组织的胰岛素信号通路中与GLUT4转位密切相关的重要蛋白-AS160，进而促进脂肪组织对葡萄糖的利用；抑制内脏脂肪组织JNK磷酸化的升高和IκBα的降解，抑制NF-κB的活化，调节内脏脂肪组织炎症因子的表达，改善局部炎症状态。 3、DIO大鼠的血TG、TC和LDL水平显著高于NC大鼠，人参皂苷Re可能通过激活肝脏的ERK，使LDL受体(LDLR)mRNA水平升高，进而通过LDLR途径改善高脂喂养大鼠的血胆固醇和LDL代谢。人参皂苷Re也可能通过激活肝脏和脂肪组织的AMPK和PPAR-α信号通路，调节机体的血脂代谢。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词说明

声明

第一部分清醒状态下大小鼠钳夹技术的建立

研究背景

材料与方法

材料

方法

结果

讨论

小结

第二部分Re对D10大鼠胰岛素敏感性影响及其机制研究

研究背景

材料与方法

材料

方法

结果

讨论

小结

第三部分Re对DIO大鼠血脂代谢影响的初步研究

研究背景

材料与方法

材料

方法

实验结果

讨论

小结

全文结论

参考文献

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致谢