瑞士乳杆菌发酵牛乳产肽对小鼠巨噬细胞免疫活性的影响

摘要

瑞士乳杆菌是制作发酵型牛乳或牛乳制品常用的一种乳杆菌，近年来发酵乳中活性成分的研究一直深受食品界的青睐，其中活性小肽的研究尤为热门。
　　本实验从两方面探究了瑞士乳杆菌发酵牛乳产生的各类小肽的对BALB/C小鼠巨噬细胞免疫学活性的影响，最后分离纯化出两个有免疫学活性的小肽并且测定了它们的序列。过程如下：
　　1.从三株瑞士乳杆菌（CICC6024、JCM1120、LH0906）中筛选出发酵活力最强的CICC6024菌株作为发酵用株。
　　2.用CICC6024菌株发酵6L脱脂乳，经过离心、超滤步骤后，制得分子量在3kD以下的小肽上清1.5L，其中0.5L冻干成干粉备用。反相高效液相色谱分离小肽上清，按峰收集其中的6个主要的色谱峰，冻干制得6个单峰小肽的干粉（按洗脱顺序依次标记为A、B、C、D、E、F）。
　　3.以2中制得的3kD小肽原液和6个单峰小肽溶液为刺激物，做巨噬细胞的吞噬实验和NO分泌实验，验证其活性。实验结果显示，3kD小肽原液以及峰A、峰B均能增强小鼠巨噬细胞的吞噬能力，所有组别NO分泌量没有显著差异。
　　4.使用电喷雾四极杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF-MS)的方法对具有活性的小肽A和B进行测序，测序结果为, A：His-Asn-Ala-Asn(M=454), B:Ser-Leu-Pro-Gln(M=443).此两序列尚未在NCBI登记。
　　本实验建立的发酵乳上清中小肽含量的测定方法以及按照疏水性分离纯化小肽的方法都具备一定的创新性，为本课题的后续研究提供了充足的实验样品和理论依据。

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第一章 文献综述

1.1乳酸菌简述

1.2发酵乳中小肽的生物学功能活性

1.3小肽含量的测定方法

1.4小肽的分离纯化方法

1.5小肽氨基酸序列测定方法

1.6本课题研究的内容与意义

第二章 发酵用瑞士乳杆菌株的筛选

2.1前言

2.2材料和仪器

2.3实验方法

2.4实验结果

2.5本章小结

第三章 瑞士乳杆菌发酵牛乳上清中小肽的分离纯化

3.1前言

3.2材料和仪器

3.3实验方法

3.4实验结果

3.5本章小结

第四章 分离纯化出的六种小肽对BA LB/C巨噬细胞免疫活性的影响

4.1前言

4.2试剂

4.3实验方法

4.4实验结果

4.5本章小结

第五章 活性小肽的测序与分析

5.1前言

5.2试剂和仪器

5.3实验方法

5.4实验结果及分析

5.5 本章小结

第六章 全文总结

6.1主要结论

6.2研究展望

参考文献

英文缩写表

致谢

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