EGFR酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼联合芳香化酶抑制剂阿那曲唑对非小细胞肺癌细胞的实验研究

摘要

目的：研究发现，表皮生长因子受体（EGFR）信号通路和雌激素受体（ER）信号通路都与肿瘤的生物学行为有密切联系，且两通路还存在信号交互作用，对非小细胞肺癌的生物学行为有重要影响。故在肺癌治疗中，ER和EGFR两条通路的双重抑制可能具有协同抗肿瘤作用。我们前期工作已用Real-time PCR 以及Western blot的方法从非小细胞肺癌细胞株A549、H460、SPC-A-1、H1299中筛检出ER（ER-α, ER-β）表达水平最高的细胞株A549。在此基础上，本研究旨在探讨EGFR酪氨酸激酶抑制剂（吉非替尼）联合芳香化酶抑制剂（阿那曲唑）作用于肺腺癌细胞株A549后，对其细胞增殖、细胞凋亡，细胞周期分布以及相关信号通路蛋白表达水平的影响，并探讨其相应的分子机制，为靶向治疗联合内分泌治疗在非小细胞肺癌领域中的应用提供理论基础。
　　 方法：采用免疫组化方法验证A549细胞株的ER（ER-α，ER-β）以及EGFR的表达水平，并进行细胞定位。然后将阿那曲唑、吉非替尼单独或联合作用于A549细胞株24小时,48小时,72小时后，用倒置显微镜观察各组细胞的形态学变化，CCK8法检测各组细胞的增殖抑制情况，PI单染分析各组细胞周期分布情况，Annexin V/PI双染检测各组细胞凋亡情况。Western blot检测两种药物对EGFR信号通路中EGFR，ERK，AKT表达水平以及EGFR，ERK，AKT磷酸化水平的影响。
　　 结果：肺腺癌细胞株A549存在ER（ER-α，ER-β）以及EGFR表达，ER-α主要在细胞浆内表达。ER-β主要在细胞浆内表达，少量在细胞核中表达。EGFR主要在胞膜和胞浆中表达。单药阿那曲唑与单药吉非替尼对A549细胞的作用均呈时间及浓度依赖性。作用24小时，48小时，72小时后，与阿那曲唑或吉非替尼单独作用相比，两药联合可以增加A549细胞的增殖抑制率（P<0.05）及细胞的凋亡比例（P<0.05）。细胞周期检测提示与两药单独作用相比，两药联合可以将更多的细胞阻滞在GO/G1期（P<0.05）。Western blot结果显示与两药单独作用相比，两药联合可降低A549细胞的EGFR，ERK ，AKT磷酸化水平。
　　 结论：阿那曲唑联合吉非替尼有协同抗肿瘤作用，在抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、及抑制EGFR下游信号通路方面呈现出比单一药物更强的作用效果。本研究提示ER信号通路和EGFR信号通路存在着交互作用，靶向治疗联合内分泌治疗将为非小细胞肺癌肺癌治疗提供一个新的方向。

目录

引 言

第1章 背 景

第2章 研究目的

第3章 实验材料与方法

第4章 实验结果

第5章 讨论

第6章 结论

第7章 展 望

第二部分 参考文献

第三部分 致谢

第四部分 攻读学位期间发表学术论文目录

第5部分 攻读学位期间参与的课题项目

第6部分 综述 EGFR与ER通路的交互作用对非小细胞肺癌的影响

论文说明：英文缩写词表

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