新型免疫抑制剂FTY720干预肺纤维化的体内及体外研究

摘要

目的：利用博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠动物模型和体外培养的人肺成纤维细胞评价新型免疫抑制剂FTY720 对肺纤维化的影响，探讨了FTY720 对肺间质炎症、组织损伤和纤维化的影响和可能的作用机制。
　　 方法：
　　 1. 应用单次气管内注入博莱霉素(3.5mg／kg体重)的方法建立C57小鼠肺纤维化模型，并通过灌胃给药FTY720 (0.1mg/kg/d)来实现对小鼠肺纤维化的干预，分别于第7，14，21天处死小鼠；
　　 2. 对小鼠肺组织进行HE 染色及Masson 染色, 观察各组肺组织病理变化并评估炎症和肺纤维化程度; 免疫组化法动态观察肺组织中TGF-β,α-SMA 的表达；通过Real-time PCR法测定肺组织中细胞因子VEGF, IL-1β, α-SMA , Col1a1mRNA的表达水平，评价FTY720在体内的抗纤维化效应；
　　 3. 体外用脂多糖刺激人肺成纤维细胞（HFL1），利用Xcelligence实时监测系统观察FTY720对HFL1细胞增殖的影响；Real-time PCR法检测细胞中TGF-β, IL-6, IL-8, MMP2, TIMP1, VEGF, α-SMA mRNA的表达水平，酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞上清中纤维连结蛋白（FN）的分泌水平，评价FTY720在体外的抗纤维化效应；
　　 4. 利用Transwell趋化实验检测FTY720对溶血磷脂酸（LPA）介导的人肺成纤维细胞趋化的影响。
　　 结果：
　　 1. 建立了稳定的博莱霉素诱导肺纤维化C57 小鼠模型，HE 染色及Masson 染色显示FTY720 干预后小鼠肺纤维化程度较模型组减轻；免疫组化结果肺组织TGF-β、α-SMA 阳性表达颗粒较模型组减少；FTY720 干预后VEGF, IL-1β，α-SMA ,Col1a1 在mRNA 水平上表达较模型组下调，且均具统计学意义；
　　 2. 体外研究发现FTY720 干预后HFL1 的增殖和趋化活性下降，细胞上清中分泌的FN 蛋白水平降低，TGF-β mRNA 表达水平下调, 且具有浓度依赖性，IL-6, IL-8, MMP2, α-SMA mRNA 水平也下调，具有统计学意义。但在TIMP1, VEGF mRNA 水平上未检测出差异。
　　 结论：
　　 1. FTY720对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化具有保护作用，可明显降低肺泡炎、肺泡破坏程度及纤维化程度；
　　 2. FTY720的保护作用主要是通过抑制TGF-β, α-SMA, VEGF, IL-1β等纤维化相关因子表达，抑制成纤维细胞增殖和趋化以及细胞外基质沉积而减缓肺纤维化的进程。

目录

前言

第一部分肺纤维化动物模型的建立以及FTY720 体内抗肺纤维化的作用评价

第二部分FTY720 对LPS/LPA 诱导的肺成纤维细胞模型的体外研究

全文结论

参考文献

致谢

Rituximab in the treatment of severe lupus myelopathy

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