骨髓来源抑制细胞在自身免疫性肝病中的作用

摘要

背景：骨髓来源抑制细胞（MDSCs）由骨髓祖细胞和未成熟骨髓细胞组成。在病理情况下如自身免疫性疾病情况下，未成熟骨髓细胞分化为成熟细胞的过程被部分阻断，从而导致MDSCs的积聚和扩增。MDSCs表达高水平的精氨酸酶1和诱导型一氧化氮合成酶，并通过多种机制发挥抑制T细胞的功能。MDSCs在肿瘤、慢性炎症及免疫相关疾病的发生发展中发挥重要作用，然而，尚缺乏MDSCs在自身免疫性肝病（AILD）发病机制中作用的研究。
　　第一部分法尼酯 X受体通过调控骨髓来源抑制细胞缓解免疫介导肝损伤
　　目的：研究法尼酯 X受体（FXR）在免疫介导肝损伤动物模型中的作用，以及对免疫调节细胞 MDSCs的调控及机制。
　　方法：分别建立两种自身免疫性肝炎动物（α-GalCer组或Con A组）模型，并同时设立FXR激动剂-GW4064治疗组（GW4064+GalCer组或GW4064+Con A组）、正常对照组和GW4064对照组，通过HE染色观察肝脏病理组织学变化，测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平来检测肝脏细胞损伤情况变化，利用流式细胞术分析肝内MDSCs表型和功能变化。使用流式细胞术分选肝脏、脾脏内单核和粒细胞型MDSCs，后通过过继性回输实验分析不同MDSCs亚群的免疫调节功能。通过PCR和免疫组化法检测 FXR对促进MDSCs积聚和趋化因子的调控作用。最后通过荧光素酶报告基因和染色质免疫共沉淀技术来探讨FXR对MDSCs功能相关表面受体PIR-B的调控机制。
　　结果：在α-GalCer诱导和Con A诱导的自身免疫性肝炎模型中均出现肝内CD11b+Ly6C+MDSCs扩增，而GW4064处理组肝内MDSCs进一步扩增，特别是CD11b+Ly6Chi单核型 MDSCs增高明显。过继性回输实验证明，在AIH模型中，肝内CD11b+Ly6Chi MDSCs的免疫抑制作用最强烈。GW4064可通过增加MDSCs相关趋化因子S100A8的表达而扩增、趋化肝内CD11b+Ly6C+MDSCs。此外，GW4064可通过增加MDSCs表面的PIR-B表达而增强其免疫抑制功能，其调控机制主要是FXR直接与PIR-B启动子区FXR反应元件相结合而促进其转录。
　　结论：FXR可通过扩增肝内MDSCs数量和增强其免疫抑制功能而缓解免疫介导肝损伤，这是维持肝内免疫稳态的重要负调控机制。
　　第二部分 MDSCs在自身免疫性肝病患者外周血和肝脏组织中的数量变化及意义
　　目的：研究 MDSCs在自身免疫性肝病（AILD）患者外周血和肝脏组织中的数量变化，并分析MDSCs数量与肝脏炎症及纤维化程度的关系，探讨MDSCs在AILD发生发展中的作用及其临床意义。
　　方法：采用流式细胞术检测自身免疫性肝炎（AIH）患者、原发性胆汁性肝硬化（PBC）、慢性乙型肝炎（CHB）患者和健康对照（HC）外周血中MDSCs水平和分型情况。采用激光共聚焦显微镜观察肝内MDSCs的分布特点。免疫组化技术检测AIH患者、PBC患者、CHB患者和健康人群肝活检组织标本中MDSCs相关指标CD33以及CD11b的分布情况，分析它们与肝脏炎症、肝脏纤维化的相关性。
　　结果：1. AIH患者、PBC患者、CHB患者外周血HLA-DRlow/-CD33+CD11b+MDSCs和HLA-DRlow/-CD33+CD11b+CD14+CD15-单核细胞型MDSCs数量均高于HC，且这些患者外周血MDSCs均以单核细胞型为主。2. AIH患者、PBC患者、CHB患者肝内CD33+细胞与CD11b+细胞基本重叠，且AIH患者、PBC患者肝内CD33+CD11b+MDSCs主要分布于汇管区。3. AIH患者、PBC患者、CHB患者肝内CD33+细胞数均高于HC；AIH患者或PBC患者肝内CD33+细胞数与肝脏的炎症活动分级及肝纤维化分期均存在正相关性。4. AIH患者、PBC患者、CHB患者肝内CD11b+细胞数均高于HC；AIH患者或PBC患者肝内CD11b+细胞数与肝脏的炎症活动分级及肝纤维化分期均存在正相关性。
　　结论：MDSCs在AILD患者外周血和肝组织中数量明显增高，且AIH患者和PBC患者肝内CD33+、CD11b+细胞数量与肝脏的炎症活动分级及肝纤维化分期均存在正相关性。提示 MDSCs在AILD的发病机制中可能起着非常重要的作用。

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前言

第一部分 法尼酯 X受体通过调控骨髓来源抑制细胞缓解免疫介导肝损伤

1.1.引言

1.2.材料与方法

1.3.结果

1.4.讨论

第二部分 MDSCs在自身免疫性肝病患者外周血和肝脏组织中的数量变化及意义

2.1.引言

2.2.材料与方法

2.3.结果

2.4.讨论

全文总结

参考文献

附录 综述： 急性起病自身免疫性肝炎的诊断与治疗

致谢

硕士学习期间发表文章与申请课题