不同年龄段前列腺基质细胞的雄激素受体对前列腺癌进展的影响

摘要

目的:研究不同年龄段前列腺基质细胞的雄激素受体的对前列腺癌进展的影响，揭示不同年龄段前列腺基质细胞的雄激素受体的功能差异，探索基质微环境对前列腺上皮影响的分子机制。
　　方法:1.通过构建AR特异性shRNA慢病毒表达载体，稳定敲除原代培养的前列腺基质细胞的雄激素受体，q-PCR及Westernblot检测干扰效率。2.应用基质-上皮共培养模型，通过CCK-8、Migrationassay测定不同年龄段基质细胞敲除AR前后对前列腺癌上皮细胞PC3、LNCaP增殖、转移能力的影响。3.应用q-PCR技术检测FGF5、IGFBP5及MMPs在各组前列腺基质细胞中的表达情况。4.通过裸鼠前列腺原位成瘤实验验证不同年龄段前列腺基质细胞敲除AR前后对PC3细胞增殖及侵袭能力的影响，应用免疫组化技术检测Ki67、MMP2在移植瘤中的表达情况。
　　结果:1.利用携带AR特异性shRNA的慢病毒表达载体可有效敲除原代前列腺基质细胞中的AR，干扰效率可达到94％。2.干扰AR前后不同年龄段基质细胞均可促进PC3、LNCaP的增殖，且老年组较年轻组基质细胞促增殖效果明显;干扰AR后，前列腺基质细胞促PC3、LNCaP细胞增殖能力减弱。干扰AR前后不同年龄段基质细胞均可促进PC3、LNCaP的迁移、侵袭能力。干扰AR前，老年组基质细胞促上皮细胞迁移、侵袭能力较年轻组更强。干扰AR后，老年组基质细胞促上皮细胞迁移、侵袭能力降低，年轻组基质细胞促上皮细胞迁移、侵袭能力增强，且老年组与年轻组之间无明显差异。3.敲除AR后，老年组、年轻组前列腺基质细胞FGF5、IGFBP5表达均降低;老年组基质MMP1表达无明显差异，年轻组基质细胞MMP1表达明显增多;老年组基质MMP2表达明显减少，年轻组基质细胞MMP2表达明显增多;老年组基质MMP7表达无明显差异，年轻组基质细胞MMP7表达明显增多;老年组、年轻组MMP7表达均明显增多。4.裸鼠体内实验发现，干扰AR前不同年龄段基质细胞均可促进肿瘤生长，且老年组基质细胞较年轻组效果明显;干扰AR后，不同年龄段基质细胞促肿瘤生长能力降低，但促瘤能力老年组仍较年轻组强。干扰AR前，不同年龄段基质细胞均可促进肿瘤转移能力，且老年组基质细胞促肿瘤转移能力较年轻组强。干扰AR后，老年组基质细胞促肿瘤转移能力降低，年轻组基质细胞促肿瘤转移能力增强，且老年组与年轻组之间无明显差异。
　　结论:不同年龄段基质细胞AR对前列腺癌上皮细胞均有促进其增殖的能力;但对前列腺癌上皮细胞转移能力的作用并不一致。老年组前列腺基质细胞AR具有促进前列腺癌细胞侵袭转移的能力，而年轻组前列腺基质细胞AR具有抑制前列腺癌细胞侵袭转移的能力。
　　意义:本研究首次阐明了AR在不同年龄段前列腺基质细胞中的作用差异，进一步说明老龄化过程中前列腺基质细胞的AR功能改变对前列腺癌进展发挥积极作用。

目录

声明

摘要

缩略词

绪论

第一部分 利用shRNA慢病毒表达载体构建雄激素受体敲除原代前列腺基质细胞

1．1 引言

1．2 材料与方法

1．3 结果

1．4 讨论

1．5 结论

第二部分 不同年龄段前列腺基质细胞敲除AR前后对PC3、LNCaP细胞的影响

2．1 引言

2．2 材料与方法

2．3 结果

2．4 讨论

2．5 结论

第三部分 动物实验验证不同年龄段前列腺基质细胞中雄激素受体对前列腺癌进展的影响

3．1 引言

3．2 材料与方法

3．3 结果

3．4 讨论

3．5 结论

全文总结

参考文献

致谢

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