CD133+肿瘤起始细胞及微环境在胆囊癌进展中的作用及晚期胆囊癌化疗新方案研究

摘要

目的:
　　胆囊癌具有恶性程度高，手术切除率低，放化疗不敏感，预后差的特点。本研究旨在明确人胆囊癌CD133+细胞的纯化及其肿瘤起始细胞特性（Tumor initiating cells，TICs）的鉴定；晚期胆囊癌化疗新方案的客观有效性及患者生活质量与安全性评估。
　　方法：
　　免疫磁珠法分选CD133+细胞亚群后，以免疫荧光法定位检测CD133蛋白表达和流式细胞仪检测CD133+细胞亚群含量。半定量聚合酶链式反应检测CD133mRNA表达，免疫蛋白印迹实验检测CD133蛋白表达。同时，检测CD133+细胞亚群的体内成瘤能力和单克隆形成能力。CCK8法检测CD133+细胞亚群的增殖能力和耐抗肿瘤药特性，Transwell法检测CD133+细胞亚群的侵袭能力。进而，半定量逆转录聚合酶链反应法鉴定相关干细胞基因的表达。采用随机、对照、开放、多中心研究传统化疗和联合化疗方案对晚期胆囊癌患者的有效性及安全性。
　　结果：
　　第一部分，GBC-SD细胞经免疫磁珠分选后CD133+细胞定位于细胞膜或细胞浆。CD133+组CD133 mRNA和蛋白相对灰度值显著高于CD133-组。CD133+组细胞克隆球形成率显著高于CD133-组。CD133+组与未分选组成瘤率分别为100%和60%，而CD133-组不成瘤。CD133+组细胞增殖能力显著强于CD133-组(P<0.05)。经氟尿嘧啶(0.1μg/ml)和吉西他滨(1μg/ml)处理后，CD133+组细胞的药物敏感性显著低于CD133-组。CD133+组穿膜细胞数显著高于CD133-组。第二部分，CD133+组CXCR4、p-Akt与CD133蛋白相对灰度值显著高于CD133-组。CD133+胆囊癌GBC-SD细胞中，SDF-1α或AMD3100可通过刺激或抑制SDF-1α/CXCR4轴表达上调或下降，进而经由Akt信号通路调控胆囊癌GBC-SD细胞CD133表达增加或减少。而抑制Akt信号通路可使胆囊癌细胞CD133表达下降。第三部分，传统用药组和化疗新方案组的总生存率（OS）和无进展生存期（PFS）显著高于传统用药组。化疗新方案组的部分缓解率（PR）显著高于传统用药组；和联合用药组的客观有效率（CR+PR）显著高于传统用药组。化疗新方案组能显著降低CA19-9和CEA水平。
　　结论:
　　1、免疫磁珠法可分离和纯化人胆囊癌GBC-SD细胞中的CD133+细胞亚群，CD133+细胞具有较强的致瘤潜能、增殖能力、侵袭能力及对化疗药物不敏感，并表达部分干细胞相关基因。
　　2、CD133+胆囊癌 GBC-SD细胞中，可能存在激活的CXCR4/Akt/CD133通路。
　　3、随机对照试验证实了在晚期胆囊癌传统化疗方案加生长抑素的化疗新方案在改善CR＋PR、OS和PFS的有效性。

目录

声明

符 号 说 明

绪论

一、肿瘤干细胞与CD133研究进展

二、肿瘤干细胞与化疗耐药及靶向治疗

三、微环境对肿瘤细胞的作用

四、生长抑素联合传统方案能否能提高晚期胆囊癌化疗敏感性

四、课题总思路及研究内容

第一部分 人胆囊癌CD133阳性肿瘤起始样细胞的分离和鉴定

1.1 引言

1.2 实验材料

1.3 实验方法

1.4 统计学方法

1.5 结果

1.6 讨论

第二部分 CD133＋肿瘤起始细胞及微环境在胆囊癌发生发展中的作用

2.1引言

2.2 实验部分

2.3 结果

2.4 讨论

第三部分 晚期胆囊癌化疗新方案有效性、安全性的随机、对照、开放、多中心临床研究

3.1 引言

3.2 资料与方法

3.3 结果

3.4 讨论

结论与展望

参考文献

致谢

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附：综述:肿瘤起始细胞耐药机制