一种新的天然SENP1抑制剂-地肤子皂苷c,抑制前列腺癌细胞的增殖

摘要

本研究分为两个部分：
　　第一部分：一种新的天然SENP1抑制剂-地肤子皂苷Ic，抑制前列腺癌细胞增殖。
　　目的：由于SUMO特异性蛋白酶1（SUMO-specific protease1，SENP1）在前列腺癌中高表达，并且与肿瘤的发生、发展和转移密切相关，被列为前列腺癌治疗的潜在靶标。本研究拟从天然五环三萜类化合物中筛选出具有SENP1抑制活性的小分子化合物，通过一系列体内、体外实验，探讨其在前列腺癌治疗中的潜在应用价值以及相应的作用机制，为抗癌新药的研发提供新思路。
　　方法：应用体外去SUMO化反应，筛选出具有SENP1抑制活性的小分子化合物；应用细胞热转移实验和药物靶标亲和反应稳定技术，检测该化合物是否可与SENP1直接结合；用免疫印迹法和实时定量PCR技术检测该化合物处理前列腺癌PC3细胞后，细胞内SUMO化蛋白水平以及SENP1表达量的变化；利用CCK8实验检测该化合物对前列腺癌细胞增殖的影响，利用流式细胞术检测其对细胞周期和细胞凋亡的影响。通过病毒感染方式建立稳定过表达SENP1的PC3Flag-SENP1细胞以及稳定敲除SENP1的PC3shSENP1细胞，验证该化合物是否通过靶向SENP1发挥其对前列腺癌细胞的抑制效应。建立前列腺癌裸鼠移植瘤模型，观察该化合物对移植瘤的生长抑制效应。
　　结果：通过体外去SUMO化反应，我们筛选得到地肤子皂苷Ic（Mc）可以显著抑制SENP1的去SUMO蛋白酶活性，并具有一定剂量依赖性；Mc可改变SENP1的热稳定性，减弱蛋白酶对SENP1的降解作用，表明在前列腺癌PC3细胞中，Mc可以和SENP1直接相互作用；Mc处理PC3细胞后，胞内SENP1的表达在mRNA和蛋白水平均降低，而SUMO化蛋白明显增多，细胞增殖受到抑制，细胞阻滞于G2/M期，凋亡细胞增加；而过表达SENP1可部分逆转Mc引起的肿瘤抑制效应；裸鼠移植瘤结果显示Mc在体内也可抑制前列腺癌PC3细胞生长，促进细胞凋亡。
　　结论：我们发现了一种新的SENP1天然抑制剂-Mc，并从多个角度探讨了Mc在前列腺癌中的肿瘤抑制效应及相关的分子机制。本研究丰富了Mc潜在的药物研发价值，同时也为五环三萜类化合物改造成为更加有效的SENP1抑制剂提供了可靠的骨架结构，为日后抗癌新药的研发提供了新思路。
　　第二部分：口腔黏膜病外周血淋巴细胞亚群的观察及分析。
　　目的：观察2种常见的口腔黏膜病--复发性阿佛他溃疡（RAU）和口腔扁平苔藓（OLP）患者外周血淋巴细胞亚群分类的变化，探讨其免疫学发病机制。
　　方法：用流式细胞术分析105例RAU患者、70例OLP患者和65名健康对照者的外周血淋巴细胞亚群（总T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、CD4+/CD8+、NK细胞、B细胞)，比较各指标的组间差异。
　　结果：与健康对照组相比，RAU组总T细胞和CD8+T细胞显著增加（P＜0.05、P＜0.01)，CD4+T细胞、CD4+/CD8+比值和B细胞均显著减少（P＜0.01、P＜0.001、P＜0.05)；而OLP组与健康对照组相比，CD8+T细胞显著降低（P＜0.05)；RAU组的总T细胞和CD8+T细胞显著高于OLP组（P＜0.01、P＜0.001)，而CD4+T细胞、CD4+/CD8+比值和NK细胞均显著低于OLP组（P＜0.01、P＜0.001、P＜0.05)。
　　结论：RAU和OLP患者多出现外周血淋巴细胞亚群百分率异常，细胞免疫功能紊乱，但二者的免疫状态存在差异，因此针对性的免疫干预将成为一项极具潜力的治疗措施。

目录

声明

全文主要缩略语中英文对照

第一部分一种新的天然SENP1抑制剂-地肤子皂苷Ic，抑制前列腺癌细胞增殖

摘要

ABSTRACT

第一章 绪论

1. 引言

第二章 Mc是SENP1的天然抑制剂

1.引言

2.实验材料及方法

3.实验结果

4.本章小结

第三章 Mc对前列腺癌细胞生物学功能的影响

1.引言

2.实验材料及方法

3.实验结果

4.本章小结

第四章 SENP1可部分抵消Mc处理引起的前列腺癌细胞生物学效应

1.引言

2.实验材料及方法

3.实验结果

4.本章小结

第五章 Mc抑制前列腺癌的体内实验

1.前言

2.实验材料及方法

3.实验结果

4.本章小结

第六章 讨论

全文小结

参考文献

第二部分口腔黏膜病外周血淋巴细胞亚群的观察及分析

摘要

ABSTRACT

第一章 绪论

第二章 材料与方法

1.病例选择

2.仪器试剂

3.方法

4.统计学方法

第三章 结果

第四章 讨论

参考文献

致谢

附录1

附录2