基于DNA水平的烟草及其衍生产品的可靠高效检测方法的建立

摘要

近年来，因为不同烟草产品的消费税不同，全世界范围内烟草非法贸易日趋严重，对烟草及其相关产品如香烟、雪茄、小雪茄、混合烟草样品的检测变得越来越重要，所以需要高通量且简单有效的检测烟草成分的方法。本文针对烟草产业存在的上述问题，研制了两种基于DNA的简单、高灵敏度、高特异性的检测烟草成分的方法：实时定量PCR法（TaqMan）和环介导等温扩增检测法（LAMP），并使用这两种新方法成功地对许多不同烟草样品和产品中的烟草成分进行了可靠和高效的检测。这两种检测方法的引物都是基于尿苷5’磷酸合酶（UMPS）基因的核苷酸序列设计的，它们的特异性和灵敏性均在不同的植物材料中得到验证。无论是 TaqMan方法还是 LAMP方法都能够既可靠又准确地检测到不同实际样品中的烟草成分，这些实际样品包括海关样品、混合烟草样品、当地购买的不同品牌的香烟以及包裹的卷烟的白纸。表明本研究研发的这两种方法在烟草成分鉴定中的巨大应用潜力，即使烟草产品的形态或化学成分已被破坏。

目录

声明

Abbreviations

Chapter 1:Introduction

1 Globally Tobacco Cultivations and Commercialization

2 Trends of Tobacco Products around the World

3 Illegal Business of Tobacco

4 Action to Handle Illegal Tobacco Business

5 Types of Tobacco Products

6 Tobacco Detection Methods

7 Real-time PCR (TaqMan)

8 Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) Method

9 Objectives of this study

Chapter 2:Experimental Materials and Methods

2.1 Plant Materials

2.2 Lab Equipment

2.3 Experimental Reagent

2.4 Methods

Chapter 3:Results and Discussion

3.1 Genomic DNA Isolation and Purification

3.2 Candidate Gene Selection

3.3 DNA Oligonucleotide Primers and Probes

3.4 Specificity Test of LAMP and Real-Time PCR

3.5 Sensitivity Test of LAMP and Real-Time PCR

3.6 Application to Detect Tobacco Components in Various Practical Samples

Chapter 4 Conclusions and Future Prospects

参考文献

Appendix

Supplementary Tables

Supplementary Figures

致谢

Academic Achievement during Study Period